29797.運用細胞膜片技術構建預血管化組織工程移植物的實驗研究

1、分類號：分類號：R78密級：密級：公開研究生學位論文校址：甘肅省蘭州市校址：甘肅省蘭州市論文題目（中文論文題目（中文）運用細胞膜片技術構建預血管化組織工程運用細胞膜片技術構建預血管化組織工程移植物的實驗研究移植物的實驗研究論文題目（外文論文題目（外文）Developmentofprevularizedtissueengineeredgraftsusingcellsheettechnologyftissueregeneration研究生姓

2、名研究生姓名李琴學科、專業(yè)學科、專業(yè)口腔醫(yī)學口腔醫(yī)學口腔正畸學口腔正畸學研究方向研究方向口腔正畸學口腔正畸學∕組織工程組織工程學位級別學位級別碩士導師姓名、職稱導師姓名、職稱任利玲任利玲教授教授論文工作論文工作起止年月起止年月2012015年7月至月至2012017年1月論文提交日期論文提交日期2012017年4月論文答辯日期論文答辯日期2012017年5月學位授予日期學位授予日期2012017年6月I運用細胞膜片技術運用細胞膜片技術構

3、建預血管化組織工程移植物構建預血管化組織工程移植物的實驗研究實驗研究中文摘要中文摘要目的目的：組織工程構建的移植物其血管網(wǎng)的形成仍是一個難題。本實驗旨在探討完全利用兔原代骨髓間充質(zhì)干細胞（BonemarrowderivedmesenchymalstemcellsBMSCs）構建預血管化的移植物，并將該移植物植入裸鼠體內(nèi)觀察是否有功能性血管生成的可行性，從而為工程血管化提供新的構建策略。方法方法：（1）兔骨髓間充質(zhì)干細胞（rBMSCs）的

4、體外培養(yǎng)及增殖、生長特征觀察：運用全骨髓貼壁法分離rBMSCs并培養(yǎng)，傳代純化，在顯微鏡下觀察rBMSCs的生長及增殖。（2）rBMSCs誘導分化為內(nèi)皮樣細胞：將增殖并傳代到第2代的rBMSCs在加入10μgL的血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）和10μgL的堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）兩種細胞因子的誘導液中誘導培養(yǎng)2周，在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及增殖、生長特性，利用流式細胞檢測技術鑒定誘導分化后的血管內(nèi)皮樣細胞（Endothelia

5、lcellsECs）。（3）構建預血管化細胞膜片：將傳至第2代的rBMSCs以9104∕cm2的密度接種至培養(yǎng)皿并培養(yǎng)2周得到未分化膜片，以5104∕cm2的密度將從rBMSCs誘導得到的ECs均勻接種至形成的未分化膜片上，加入內(nèi)皮細胞誘導液培養(yǎng)3天，鏡下觀察細胞的分布及微血管網(wǎng)生成情況。（4）三維預血管化移植物的構建：將在內(nèi)皮細胞誘導培養(yǎng)液中共培養(yǎng)7天的預血管化膜片（ECsrBMSCs）用細胞刮刀輕輕刮起，用鑷子將膜片折疊三次，形成大

6、約長8mm寬8mm的三維預血管化細胞膜片結(jié)構，作為實驗組。將未分化細胞膜片以同樣的方法折疊，形成三維的未血管化細胞膜片結(jié)構，作為對照組。將折疊后的細胞膜片結(jié)構放置內(nèi)皮細胞誘導培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時，使其成為一個整體。（5）體內(nèi)實驗：將孵育24小時后的兩組膜片分別植入裸鼠的背部皮下，并在術后1周、2周兩個時間點進行大體觀、HE染色及免疫組織化學染色檢測。結(jié)果結(jié)果：（1）通過全骨髓貼壁法獲得了rBMSCs，該細胞在顯微鏡下的形態(tài)呈現(xiàn)梭形、多角