RNA干擾技術(shù)沉默A-FABP基因?qū)χ炯?xì)胞合成甘油三酯及脂聯(lián)素分泌的影響.pdf

1、目的:應(yīng)用RNA干擾技術(shù),構(gòu)建針對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞A-FABP的Micro RNA表達(dá)載體,研究干擾A-FABP基因的表達(dá)對(duì)脂肪細(xì)胞合成甘油三酯及脂聯(lián)素分泌的影響。
　　方法:構(gòu)建靶向A-FABP基因的microRNA表達(dá)載體,將上述載體轉(zhuǎn)染3T3-L1脂肪細(xì)胞后,用RT-PCR及Western Blot檢測(cè)A-FABP mRNA及蛋白的表達(dá)。將誘導(dǎo)成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞與0~1mmol/ L的游離脂肪酸(FFA)共孵育2

2、4h,用ELISA法測(cè)定其甘油三酯及脂聯(lián)素濃度。建立 A-FABP基因沉默細(xì)胞模型,選取0.5mmol/L的游離脂肪酸(FFA)與成熟脂肪細(xì)胞共孵育24h,實(shí)驗(yàn)分四組:①對(duì)照組②對(duì)照組+0.5mmol/LFFA③RNAi組④RNAi組+0.5mmol/LFFA;用ELISA法分別測(cè)定其甘油三酯及脂聯(lián)素的濃度,并用 RT–PCR法檢測(cè)沉默前后脂肪細(xì)胞A-FABP及脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.設(shè)計(jì)并構(gòu)建了靶向A-FABP基因

3、的microRNA表達(dá)載體,該載體轉(zhuǎn)染脂肪細(xì)胞后,能顯著抑制A-FABP mRNA和蛋白的表達(dá)。2.隨著脂肪酸濃度的增高,與其共孵育的脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯濃度隨著增高(P<0.05),而脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素的分泌逐漸降低(P<0.05)。3.與對(duì)照組相比,沉默A-FABP基因后的RNAi組脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯濃度明顯降低(P<0.05),而脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素分泌增多,其mRNA表達(dá)上調(diào),差異具有顯著性( P<0.05)。
　　結(jié)論: RNAi技