杜仲木脂素對(duì)HepG2細(xì)胞甘油三酯聚集的影響.pdf

1、背景:高甘油三酯血癥是心血管疾病剩留風(fēng)險(xiǎn)的主要危險(xiǎn)因素之一，目前，臨床上針對(duì)性控制血漿甘油三酯的藥物種類較少，療效和安全性存在缺陷，開發(fā)新的降甘油三酯藥物具有重要意義。杜仲含有多種藥理活性成分，具有降血壓、降血脂、抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)心肌等作用。杜仲木脂素是從杜仲中提取的有效部位。在治療高血壓疾病的臨床應(yīng)用中，杜仲木脂素可降低伴隨有高血脂的患者的血漿甘油三酯。因此，研究杜仲木脂素對(duì)甘油三酯代謝的影響，闡明其機(jī)制，將為杜仲木脂素降

2、甘油三酯功效的開發(fā)和臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　目的:研究杜仲木脂素對(duì)油酸孵育的HepG2細(xì)胞甘油三酯聚集的影響及其機(jī)制。
　　方法:本課題采用HepG2細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料。
　　在研究杜仲木脂素對(duì)HepG2生長(zhǎng)的影響實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)分為7組（空白對(duì)照組，15mg/L，37.5mg/L，75mg/L，150mg/L，300mg/L，600mg/L木脂素干預(yù)組）。采用MTT一步法檢測(cè)A490值來(lái)評(píng)估細(xì)胞數(shù)目。
　　在研究

3、杜仲木脂素對(duì)OA孵育的HepG2細(xì)胞甘油三酯聚集的影響實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)共分為6組:空白對(duì)照組;油酸(OA)孵育模型組(0.5mMOA);低濃度（0.5mMOA+15mg/L杜仲木脂素）、中濃度(0.5mMOA+30mg/L杜仲木脂素)和高濃度杜仲木脂素組（0.5mMOA+45mg/L杜仲木脂素）;非諾貝特組（0.5mMOA+100μmol/L非諾貝特）。采用酶法測(cè)定細(xì)胞的甘油三酯含量;采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測(cè)細(xì)胞PPARα、FA

4、S、CPT1A的mRNA，蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)細(xì)胞FAS、CPT1A、PPARα蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:與正常對(duì)照組相比，15mg/L～300mg/L杜仲木脂素組細(xì)胞數(shù)目差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，無(wú)細(xì)胞毒性。而600mg/L杜仲木脂素組的細(xì)胞數(shù)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（0.83±0.17vs1.00±0.08，P=0.011）。
　　與空白對(duì)照組相比，用0.5mM的OA孵育的HepG2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量增加（3.13±0.27v

5、s1.00±0.00，P＜0.001）;中高濃度杜仲木脂素可以抑制HepG2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的聚集(2.25±0.12vs3.13±0.27，P＜0.000;2.42±0.13vs3.13±0.27，P＜0.001)。
　　與正常對(duì)照組相比，模型組的CPT1AmRNA表達(dá)增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（1.62±0.07vs1.00±0.02，P＜0.001）;PPARαmRNA表達(dá)減少（0.85±0.10vs1.00±0.03，P=0.

6、019）;與模型組相比，低中高不同濃度的杜仲木脂素組可增加CPT1AmRNA的表達(dá)，并具有劑量依賴性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（1.89±0.07，2.06±0.11，2.26±0.11vs1.62±0.07，P=0.013，P＜0.001，P＜0.001）;PPARαmRNA表達(dá)增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（1.06±0.05，1.19±0.03，1.24±0.06vs0.85±0.10，P=0.002，P＜0.001，P＜0.001）;與模型

7、組相比，非諾貝特組可顯著增加CPT1A、FAS和PPARαmRNA的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2.78±0.21vs1.62±0.07，P=0.001;1.53±0.15vs0.88±0.19，P＜0.001;0.97±0.09vs0.85±0.10，P=0.046)。
　　與正常對(duì)照組相比，模型組的CPT1A蛋白表達(dá)增加（1.14±0.03vs1.00±0.01,P＜0.001），PPARα表達(dá)增加(1.22±0.01vs1.0

8、0±0.03，P＜0.001)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組相比，低中高不同濃度的杜仲木脂素組可促進(jìn)CPT1A（1.42±0.04，1.90±0.01，2.04±0.04vs1.14±0.03，P＜0.001，P＜0.001，P＜0.001）、FAS（1.11±0.01，1.39±0.01，1.50±0.03vs1.00±0.01，P=0.011，P＜0.001，P=0.011）和PPARα（1.32±0.03，1.52±0.01，1.

9、83±0.04vs1.22±0.01，P＜0.001）的蛋白表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組相比，非諾貝特組可增加CPT1A、FAS和PPARα的蛋白表達(dá)（2.51±0.10vs1.14±0.03，P=0.010，1.21±0.01vs1.00±0.01，P=0.002，1.33±0.02vs1.22±0.01，P＜0.001）。
　　結(jié)論:杜仲木脂素可以抑制OA孵育的HepG2細(xì)胞的甘油三酯聚集，其機(jī)制可能與激活PPARα，上