腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的hTGFβ1和hVEGF雙基因聯(lián)合體內(nèi)轉(zhuǎn)染阻逆羊椎間盤退變的生物學(xué)效應(yīng).pdf

1、目的：建立羊椎間盤退變模型；應(yīng)用腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus，AAV)介導(dǎo)人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β<,1>(human transforming growth factor-β<,1>，hTGF-β<,1>)和人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(human vascular endothelial growth factor，hVEGF)基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染羊退變椎間盤，觀察AAV-hTGF-β<,1>和hVEGF的表達(dá)以及單基因轉(zhuǎn)染和雙基

2、因聯(lián)合轉(zhuǎn)染對(duì)退變椎間盤的生物學(xué)作用。 方法：成年SPF(specific pathogen flee，SPF)級(jí)去勢(shì)山羊，通過11號(hào)刀片損傷椎間盤前外側(cè)纖維環(huán)的方法建立椎間盤退變模型，造模后4、8、12、24周分別進(jìn)行影像學(xué)和組織學(xué)檢測(cè)，觀察造模椎間盤變化。將造模成功動(dòng)物隨機(jī)分為A、B、C、D和E 5組，各組分別于造模椎間盤內(nèi)注射50μL試劑：A組rAAV2-hTGFβ<,1>、B組rAAV2-hVEGF、C組rAAV2-hTG

3、F β<,1>+rAAV2-hVEGF、D組磷酸鹽緩沖液(PBS)、E組rAAV2-EGFP(enhanced green fluorescent protein，EGFP)。轉(zhuǎn)染后2、4、8、12周時(shí)分別進(jìn)行影像學(xué)、組織學(xué)和生物化學(xué)檢測(cè)。 結(jié)果： (1)影像學(xué)和組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明造模動(dòng)物椎間盤發(fā)生緩慢、可靠的退行性變。 (2)基因轉(zhuǎn)染后椎間盤的變化 ①影像學(xué)檢測(cè)：A組、C組動(dòng)物椎問盤高度指數(shù)(disc

4、height index，DHI)均高于D組，C組更顯著，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；B組與D組無顯著性差異。 ②組織學(xué)檢測(cè)：HE、Safranine 0染色后觀察到A組、C組動(dòng)物椎間盤細(xì)胞數(shù)目減少量、結(jié)構(gòu)紊亂程度、髓核纖維環(huán)界限模糊程度等均低于D組。B組與D組無顯著性差異。免疫組化染色后觀察到：A組、C組動(dòng)物椎間盤髓核中Ⅱ膠原含量下降程度、纖維環(huán)中Ⅰ膠原含量下降程度均低于D組，C組更顯著，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B組與D組無顯著性差異；轉(zhuǎn)染兩

5、周后，A組、B組和C組的rAAV2-hTGF β<,1>、rAAV2-hVEGF和rAAV2-hTGF β<,1>+rAAV2-hVEGF較D組顯著增多；E組動(dòng)物轉(zhuǎn)染后12周仍可觀察到EGFP的表達(dá)。 ③生物化學(xué)檢測(cè)：A組、C組動(dòng)物椎間盤Ⅰ、Ⅱ型膠原和蛋白多糖的含量下降程度均低于D組，C組更顯著，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；B組與D組無顯著性差異。 結(jié)論： (1)本方法可以成功建立一種椎間盤退變動(dòng)物模型； (2)r