兩個osvdac基因的原核表達(dá)及其對水稻的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、電壓依賴性陰離子通道(voltage-dependent anion channel, VDAC)是一種由小的多基因家族編碼的離子孔道蛋白，它們主要依賴電壓來調(diào)節(jié)其對陰陽離子的選擇性。VDAC 主要存在于線粒體膜上，它除了在線粒體的能量代謝和物質(zhì)代謝中起重要性作用外，還與細(xì)胞凋亡的誘發(fā)有關(guān)。
　　 本實驗室前期通過生物信息學(xué)方法對粳稻日本晴全基因組掃描，發(fā)現(xiàn)在日本晴基因組中至少存在8個vdac的同源候選基因。相比在哺乳動物中僅含

2、三個的vdac基因，在水稻中的8個同源vdac基因所編碼的蛋白在結(jié)構(gòu)、定位及其生物學(xué)功能，值得深入研究。
　　 本研究首先克隆獲得vdac3和vdac5兩個基因的ORF，探討兩個原核高效表達(dá)條件和蛋白純化條件，制備其抗體；與含GFP的植物表達(dá)載體重組，遺傳轉(zhuǎn)化，期望研究其細(xì)胞定位。取得的研究結(jié)果如下。
　　 1.根據(jù)osvdac3和osvdac5 設(shè)計特異性引物，通過PCR 從YTB的Cdna中擴增獲得2個vdac基因的

3、ORFs，與含有His 標(biāo)簽的原核表達(dá)載體Pet-30a 重組，獲得了重組質(zhì)粒Pet-30a-osvdac3和Pet-30a-osvdac5；將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞，重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的最佳條件為15 ℃，0.7 mmol/L IPTG 誘導(dǎo)17 h；目的蛋白通過親和層析分離純化，經(jīng)SDS-PAGE分析顯示為單一帶。
　　 分離純化的蛋白質(zhì)樣品，經(jīng)過其N 端的質(zhì)譜檢測分析，結(jié)果與預(yù)期的2個基因的表達(dá)產(chǎn)物一致；用純