人骨髓間充質干細胞與堿性成纖維細胞因子對人體創(chuàng)面愈合的促進作用.pdf

1、骨髓間充質干細胞(MSCs)又稱骨髓基質細胞(BMSCs)，存在于骨髓中，來源廣泛，取材容易，能迅速培養(yǎng)增殖。骨髓間充質干細胞來源于中胚層，具有很強的自我復制和多向分化潛能，可產生具有各種表型的子代細胞，分布在全身各結締組織中，在體內和體外可以分化成為間質組織(包括骨、軟骨、脂肪、肌肉)、神經組織和肝細胞等。由于MSCs能分化為各種不同的組織，因此在創(chuàng)傷修復方面有廣泛的應用。在皮膚微環(huán)境下，MSCs可以分化為表皮組織細胞，已經在動物實驗

2、中得到了證明。在部分模擬皮膚微環(huán)境的體外實驗中，人MSCs可以出現(xiàn)表皮細胞角蛋白的表達，也已經有所報道。 本研究通過體外分離、培養(yǎng)、誘導人骨髓間充質干細胞，利用體外細胞培養(yǎng)，免疫組織化學、流式細胞儀等技術，從細胞生物學、細胞表型表達等方面來觀察人骨髓間充質干細胞在體外培養(yǎng)條件下表皮細胞角蛋白表達等指標，通過自體對照實驗研究MSCs與bFGF共同作用于人體創(chuàng)面后對創(chuàng)面愈合的促進作用。 目的: 人骨髓間充質干細胞的分

3、離、培養(yǎng)、鑒定及體外培養(yǎng)條件下，人MSCs向表皮細胞的分化及表皮細胞角蛋白表達；MSCs與bFGF共同作用于人體創(chuàng)面后對創(chuàng)面愈合的促進作用。 方法: 1.無菌條件下取五月齡以上胎兒股骨骨髓腔抽洗液，F(xiàn)icoll-Paque密度梯度離心法提取骨髓間充質干細胞、無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)并擴增。顯微鏡下觀察細胞的生長形態(tài)并用免疫細胞化學及流式細胞儀測定細胞表面CD34、CD44，進行骨髓間充質干細胞的鑒定。 2.用18歲以下新

4、鮮包皮組織培養(yǎng)人成纖維細胞并收集上清液。 3.MSCs 隨機分為對照組和誘導組，用含人成纖維細胞上清液的培養(yǎng)液(10％FBS/DMEM+30％人成纖維細胞上清液+10ng/mlEGF)誘導人MSCs向表皮細胞分化(含血清DMEM培養(yǎng)液作為對照組)，免疫細胞化學染色觀察誘導后CK19含量變化并觀察細胞形態(tài)變化。 4.選取有兩個以上創(chuàng)面患者，用自體對照試驗，研究人MSCs與bFGF共同作用于人體創(chuàng)面后對創(chuàng)面愈合的促進作用(

5、單純使用bFGF的創(chuàng)面作為對照組)。采用SPSS11.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。處理組與對照組的創(chuàng)面閉合指數(shù)的比較在方差齊性檢驗的基礎上采用兩獨立樣本t檢驗。 結論: 1.采用密度梯度離心法可以從人骨髓中分離、培養(yǎng)得到細胞成份均一的骨髓間充質干細胞，顯示間質干細胞表面標記抗原CD44陽性，造血干細胞表面標記抗原CD34陰性，細胞生長形態(tài)未發(fā)生明顯變化。 2.骨髓間充質干細胞在體外經成纖維細胞上清液誘導后可出現(xiàn)表