總狀共頭霉SPSR的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá).pdf

1、植物寄生線蟲是植物病害的重要病原物之一，其寄生范圍廣，對(duì)全世界農(nóng)作物生產(chǎn)構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。第一代線蟲生防因子為活菌制劑，受環(huán)境影響較大；第二代線蟲生防因子制劑多為脂溶性，水中溶解度差，實(shí)際應(yīng)用困難。本實(shí)驗(yàn)室篩選出的絲狀真菌Syncephalastrum racemosum，其發(fā)酵液具有很強(qiáng)的殺線蟲活性，且為酸性、耐熱，這與Syncephalastrum racemosum產(chǎn)的天冬氨酸蛋白酶syncephapepsin的酸性蛋白屬性相一致，

2、因此有必要研究該酶是否在Syncephalastrum racemosum代謝產(chǎn)物殺線蟲過程中發(fā)揮作用。 本論文通過RT-PCR方法克隆了總狀共頭霉的天冬氨酸類蛋白酶基因，并選擇了四種pET載體，在大腸桿菌中進(jìn)行了原核表達(dá)，主要研究結(jié)果如下：1．以總狀共頭霉(Syncephalastrum racemosum)菌株總RNA為模板，通過RT-PCR方法，獲得了去除自身信號(hào)肽的天冬氨酸類蛋白酶syncephapepsin基因。2．構(gòu)

3、建了克隆載體pUCl8-SPSR，并對(duì)SPSR基因進(jìn)行了序列測(cè)定。經(jīng)過分析，得到了該基因片段的序列，大小為656bp。通過BLAST比對(duì)，與天冬氨酸蛋白酶syncephapepsin基因同源性達(dá)到90％。3．選擇了pET載體系統(tǒng)中的四種載體：pET-22b(+)、pET-28a(+)、pET-30a(+)、pET-40b(+)，分別構(gòu)建了表達(dá)載體。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，通過SDS-PAGE電泳進(jìn)行鑒定，該蛋白大小約為38KDa，并已成功表達(dá)