野桑蠶羧酸酯酶基因的克隆及在大腸桿菌中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、根據(jù)NCBI上的家蠶羧酸酯酶基因序列(GenBank登錄號DQ443360)設計引物，提取野桑蠶中腸的RNA，采用RT-PCR方法，克隆了野桑蠶羧酸酯酶基因(GenBank登錄號：EF157830)。序列分析表明，該基因的ORF為1923 bp，編碼641個氨基酸，預測其相對分子質(zhì)量約為71.7 kD，等電點為4.82。野桑蠶羧酸酯酶核苷酸序列及推導的氨基酸序列經(jīng)與家蠶同源比較發(fā)現(xiàn)兩者有33個堿基、12個氨基酸的差異，核苷酸和氨基酸同源

2、性分別達到98.3％和98.6％。經(jīng)與桃蚜(Myzus persicae)、果蠅(Drosophilaps Pseudoobscura)、棉鈴蟲(Helicoverpa armigera)等進行同源性比較發(fā)現(xiàn)不同昆蟲間酯酶的同源性較低，但是它們都具備在酯酶活性中心位置，二硫鍵形成位點處存在高度保守的氨基酸序列的特征，因此推測其可能與昆蟲抗性相關(guān)。 將野桑蠶羧酸酯酶基因克隆進原核表達載體pET-28a(+)，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21

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