不同劑量的紫蘇油對大鼠血清膽固醇水平的影響及其機制探討.pdf

1、當前心血管疾病已成為我國成年人死亡的主要原因之一，而血脂異常特別是高膽固醇血癥是導致心血管疾病發(fā)生發(fā)展的主要危險因素之一。因此，預防和控制血脂異常特別是高膽固醇血癥的發(fā)生發(fā)展對降低心血管疾病的發(fā)病率和改善其預后有著極為重要的意義。 動物實驗已經證明紫蘇油可以降低大鼠血中膽固醇水平，但其機制尚不清楚。肝臟在調節(jié)機體膽固醇的平衡中發(fā)揮著中心作用。首先，體內膽固醇70％～80％由肝臟合成，3-羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(3-hydr

2、oxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase，HMG-CoA R)是膽固醇合成的限速酶；其次，在肝中轉化為膽汁酸是膽固醇在體內代謝的主要去路，而膽固醇7a-羥化酶(cholesterol 7a-hydroxylase，CYP7A1)是調節(jié)膽汁酸合成的限速酶，所以這兩個酶在維持機體膽固醇的內穩(wěn)態(tài)中起著重要作用。本實驗用不同劑量的紫蘇油替代高脂飼料中的豬油對Wistar大鼠進行干預，觀察了其對大鼠血清膽

3、固醇水平和HMG-CoA R及CYP7A1 mRNA表達的影響，旨在闡明紫蘇油對大鼠血清膽固醇水平的影響及其分子機制。 材料與方法： 1、動物的分組 45只雄性Wistar大鼠適應性飼養(yǎng)一周后，按體重隨機分為5組：基礎對照組(基礎組)，豬油對照組(豬油組)，紫蘇油低劑量組(紫蘇油I組)，紫蘇油中劑量組(紫蘇油Ⅱ組)，紫蘇油高劑量組(紫蘇油Ⅲ組)?；A組喂飼基礎飼料，豬油組喂飼豬油高脂飼料，其構成為：83.75％的

4、基礎飼料，15％豬油，1％膽固醇和 0.25％的膽鹽；各紫蘇油干預組的飼料分別用6％、10％和15％的紫蘇油替代豬油高脂飼料中相同比例的豬油配制而成，干預時間為8w。 2、樣品采集 實驗結束時，對大鼠禁食12h后稱重，用乙醚麻醉，由腹主動脈采血，分離血清。分離肝臟，分離雙側。腎臟周圍、雙側附睪周圍和腸系膜脂肪墊，分別稱重。 3、指標分析 (1)血脂的測定：按試劑盒說明，在ECOM-F6124半自動

5、生化分析儀上測定血清中總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(10w-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)。 (2)計算肝指數和內臟脂肪／體重比值：①肝指數(％)=肝重(g)／體重(g)X 100；②腎周脂

6、肪／體重(％)=雙側腎臟周圍脂肪重(g)／體重(g)×100；③睪周脂肪／體重(％)=雙側附睪周圍脂肪重(g)／體重(g)×100；④腸系膜脂肪／體重(％)=腸系膜脂肪墊重(g)／體重(g)×100；⑤內臟脂肪／體重(％)=[雙側腎臟周圍脂肪重(g)+雙側附睪周圍脂肪重(g)+腸系膜脂肪墊重(g)]／體重(g)×100。 (3)檢測各組大鼠肝臟病理改變：觀察各組大鼠肝臟色澤，取部分肝組織放入10％中性甲醛中固定，常規(guī)石蠟包埋，切

7、片，進行HE染色，光鏡下觀察大鼠肝組織病理學改變。 (4)肝臟中mRNA表達量的測定：用RNAout試劑提取30～50mg肝組織中總RNA。取總RNAl μl，按Takara RNA PCR試劑盒說明，進行RT-PCR反應。測試指標為HMG-CoA R和CYP7A1，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde 3-phosphte dehydrogenase，GAPDH)作為對照。各指標反應條件相同，逆轉錄反應條件為

8、：30℃ 10min，42℃ 30min，99℃ 5min，5℃ 5min。擴增反應條件為：94℃ 2min；94℃ 30sec，54℃ 30sec，72℃ 30sec，31個循環(huán)；再在72℃延伸10min。取預染液染色的擴增產物7μl，在genefinder染色的2％瓊脂糖凝膠中電泳后，于凝膠成像分析儀下拍照，以各目標產物與GAPDH產物的灰度值X面積的比值表示該指標的相對表達量。 4、統計分析 實驗結果用X+S表示，

9、用SPSS11.5統計軟件進行單因素方差分析，檢驗水準為p<0.05。 結果： 1、動物一般狀況及體重變化 實驗期間，除紫蘇油Ⅲ組有一只大鼠死亡外，其余各組大鼠生長發(fā)育未見異常表現。各組大鼠體重增量，以豬油組最多，紫蘇油Ⅲ組最少，但各組間的差異無統計學意義(p>0.05)。各組大鼠攝食量以紫蘇油Ⅲ組最低，與其他各組比較，差異有統計學意義(p<0.05)。各組飼料效價也以紫蘇油Ⅲ組最低，但組間的差異無統計學意義(p

10、>0.05)。 2、各組大鼠血脂水平 比較各組大鼠TC、TG水平，均以豬油組最高，其中TC水平的差異均具有統計學意義(p<0.05)，TG水平上，豬油組與紫蘇油Ⅱ組和紫蘇油Ⅲ組的差異具有統計學意義(p<0.05)；LDL-C水平也顯示出豬油組高于其他各組的趨勢；比較各組HDL-C水平，各紫蘇油組均低于基礎組(p<0.05)，紫蘇油Ⅱ組和紫蘇油Ⅲ組還低于豬油組(p<0.05)。 3、各組大鼠肝指數和內臟脂肪／體重比

11、值 與基礎組比較，其他各組大鼠肝指數均有升高(p<0.01)，紫蘇油Ⅲ組大鼠肝指數還高于豬油組大鼠肝指數(p<0.01)。紫蘇油Ⅱ組腸系膜脂肪／體重高于其他各組(p<0.05)；紫蘇油II組腎周脂肪／體重、睪周脂肪／體重和內臟脂肪／體重在絕對值上也高于其他各組，但其間差異無統計學意義(p>0.05)。 4、各組大鼠肝臟病理改變 觀察各組大鼠肝臟大體標本發(fā)現，基礎組大鼠肝臟顏色鮮紅，而其它各組大鼠的肝臟呈土黃色，切

12、面呈油膩感。由各組大鼠肝臟HE切片可見，基礎組大鼠肝細胞沒有脂肪變性，而其他各組大鼠均有少量的肝細胞發(fā)生了脂肪變性。 5、各組大鼠肝臟中HMG-CoA R和CYP7A1 mRNA的相對表達量 各組大鼠之間，HMG-CoA R tuRNA和CYPTA1 mRNA表達量的差異均無統計學意義(p>0.05)。 結論： 1、不同劑量的紫蘇油均可降低大鼠血清TC水平，但并未呈現出劑量反應關系，綜合其他指標觀察，以低