原發(fā)性肝癌組織中糖胺聚糖組成與結(jié)構(gòu)的變化.pdf

1、糖胺聚糖主要存在細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞膜,是重要的生物大分子,在很多腫瘤組織中,均發(fā)現(xiàn)糖胺聚糖的含量、組成、分子大小及分子結(jié)構(gòu)與相應(yīng)的正常組織有明顯差異,其中有些差異對腫瘤預(yù)后有明顯影響。但在同一腫瘤的不同組織學(xué)類型以及同一組織學(xué)類型腫瘤細(xì)胞的不同分化程度之間,糖胺聚糖的差異是否依然存在目前尚知之甚少。因此,本論文的目的在于探討肝癌組織的不同組織學(xué)類型之間,以及肝細(xì)胞癌的不同分化程度之間糖胺聚糖的含量、組成、相對分子量及二糖組成的差異。本論文

2、第一章建立了從少量肝組織中微量分離純化糖胺聚糖的方法。采用胰蛋白酶及中性蛋白酶兩步酶解法提取糖胺聚糖,采用透析、陽離子交換法、凝膠過濾法及陰離子交換法純化,成功地從1克新鮮豬肝組織中分離純化得到100～200微克硫酸乙酰肝素,所得的制品經(jīng)薄層色譜檢查不含蛋白質(zhì),經(jīng)醋酸纖維素薄膜電泳法檢查不含其它糖胺聚糖成分,表明該法可用于少量組織中微量糖胺聚糖的分離和純化中。本論文第二章建立了糖胺聚糖的微量結(jié)構(gòu)分析方法。分別比較了化學(xué)降解法及酶解法降解

3、糖胺聚糖效果的差異,并對酶解法得到的不同二糖采用高效液相離子色譜法進(jìn)行分離,并比較了2-氨基苯甲酰胺熒光標(biāo)記法標(biāo)記前后檢出限量的差別,將糖胺聚糖二糖分析方法的靈敏度提高到100pg以下。并對經(jīng)分離純化得到的豬肝組織硫酸乙酰肝素的二糖組成進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)與豬內(nèi)腸組織硫酸乙酰肝素有明顯差異,證明了二糖組成分析是比較不同來源糖胺聚糖細(xì)微結(jié)構(gòu)差異的良好方法。本論文第三章采用組織學(xué)方法,以Edmondson組織病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn),對肝癌組織進(jìn)行了病理學(xué)

4、診斷,并將肝癌組織分為肝內(nèi)膽管癌、高分化肝細(xì)胞癌、中分化肝細(xì)胞癌及低分化肝細(xì)胞癌四組,為從事不同肝癌組織中糖胺聚糖的結(jié)構(gòu)差異比較提供了前提。本論文第四章采用已建立的分離純化及結(jié)構(gòu)分析的方法對不同肝癌組織中糖胺聚糖的差異進(jìn)行了比較。研究發(fā)現(xiàn),肝內(nèi)膽管癌中透明質(zhì)酸水平顯著增高,而肝細(xì)胞癌中透明質(zhì)酸僅輕度增高。隨著肝細(xì)胞癌中腫瘤細(xì)胞分化程度的降低,硫酸軟骨素含量及相對比例均逐步增高,而硫酸乙酰肝素相對比例逐步降低,且低分子量糖胺聚糖比例也增高