GSTs、CAT基因多態(tài)性與疾病易感性分析及功能研究.pdf

1、白癜風是臨床常見的色素脫失性疾病，關(guān)于黑素細胞破壞或凋亡的病理機制眾說紛紜，從若干角度提出研究假說，涉及遺傳、自身免疫、神經(jīng)介質(zhì)、氧化應激、細胞毒作用、微環(huán)境紊亂等諸多方面。近年的研究表明，氧化應激產(chǎn)生大量活性氧自由基及脂質(zhì)過氧化物等，在觸發(fā)黑素細胞破壞或功能障礙方面扮演重要角色。氧化-抗氧化機制穩(wěn)定的情況下，機體應對環(huán)境物理、化學刺激時，抗氧化劑能夠迅速清除有害自由基，保護機體免受氧化損傷。具有特殊遺傳背景（存在致病性遺傳變異）的個體

2、，黑素細胞抵御外界有害刺激能力下降，抗氧化機制失調(diào)，細胞容易發(fā)生壞死或凋亡。
　　過氧化氫酶（catalase）、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GlutathioneS-transferaseGSTs）是重要的抗氧化酶，其編碼基因變異有可能造成蛋白表達或功能異常。目前尚無抗氧化酶基因多態(tài)性與漢族人白癜風相關(guān)性的研究，因此我們以西北漢族人群為研究對象，通過大規(guī)模病例-對照研究，檢測分析抗氧化酶編碼基因CAT、GSTM1、GSTT1、GSTP1

3、啟動子區(qū)或外顯子區(qū)重要單核甘酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphismSNP)位點的分布頻率，探討突變型個體與白癜風易感性的關(guān)系，并對啟動子區(qū)SNP位點進行初步功能學研究，從分子機制初步闡述抗氧化酶基因遺傳變異在白癜風發(fā)病中的作用，為白癜風機理研究和臨床治療提供線索和理論依據(jù)。
　　方法：
　　本實驗收集749例白癜風患者和763例正常人DNA樣本，通過PCR-RFLP和多重PCR的方法檢測了4個基因

4、共8個SNP位點(GSTT1、GSTM1、GSTP1Ile104Val、GSTP1Ala113Val、GSTP1Gly169Asp、CAT-89A>T、CAT389C>T、CAT419C>T)的基因型，SAS軟件統(tǒng)計白癜風患者和正常人群中的分布頻率，分析其與疾病的關(guān)聯(lián)性。對CAT基因啟動子區(qū)SNP進行初步功能學研究，構(gòu)建含啟動子區(qū)不同等位基因的重組質(zhì)粒，瞬時轉(zhuǎn)染細胞，利用熒光素酶報告基因分析啟動子區(qū)單點突變對基因轉(zhuǎn)錄活性的影響，ELIS

5、A檢測不同基因型個體血清中過氧化氫酶活性。
　　結(jié)果：
　　1.GSTT1基因缺失型個體罹患白癜風的風險增高(校正OR1.42,95％可信區(qū)間1.16-1.75)，而GSTM1基因缺失僅表現(xiàn)為風險性增加趨勢(P=0.059,校正OR1.22,95％可信區(qū)間0.99-1.49)；GSTT1/GSTM1聯(lián)合基因缺失的個體更容易發(fā)生白癜風(校正OR1.71,95％可信區(qū)間1.28-2.28)。
　　2.GSTP1基因3個多態(tài)

6、性位點中，GSTP1Ile104Val在白癜風患者和正常人群中分布無明顯差異，GSTP1Ala113Val和GSTP1Gly169Asp在本研究樣品中僅檢測到極少數(shù)變異，提示不同種族間基因突變頻率存在差異。
　　3.CAT-89A>T位點等位基因在白癜風患者和正常人群中分布有顯著差異，攜帶突變基因型的個體患病風險增高；CAT389C>T位點與疾病無明顯關(guān)系；CAT419C>T位點在本研究入選樣本中表現(xiàn)同質(zhì)性。
　　4.CAT

7、-89A>T和CAT389C>T存在協(xié)同作用，個體患病風險隨等位基因突變個數(shù)增加而增加；CAT-89A>T和CAT389C>T之間也有相互作用，CAT-89AT基因型個體常攜帶CAT389TT基因型，其患病風險大大增加(校正OR1.71,95％可信區(qū)間1.59-5.64)。
　　5.經(jīng)軟件分析預測及熒光素酶報告基因分析，CAT-89A>T位點發(fā)生遺傳變異(A→T)后，轉(zhuǎn)錄活性發(fā)生明顯改變；含突變等位基因的序列可能結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子Sp1

8、，影響正常轉(zhuǎn)錄。
　　6.同正常人群相比，白癜風患者血清中過氧化氫酶活性明顯下降；CAT-89不同基因型個體血清過氧化氫酶活性無顯著差異。
　　結(jié)論：
　　1.GSTT1基因和GSTM1基因與漢族人白癜風有顯著相關(guān)性，基因缺失的個體患病風險增高；GSTP1基因外顯子區(qū)Ile104Val、Ala113Val和Gly169Asp3個多態(tài)性位點對白癜風發(fā)病無明顯影響。
　　2.CAT-89A>T多態(tài)性位點與白癜風發(fā)病有