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1、該文研究了熱休克反應(yīng)對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞中IL-18表達(dá)的調(diào)節(jié)效應(yīng).43℃熱休克處理顯著抑制了LPS引起的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7中IL-18 mRNA和蛋白水平的增加,這一發(fā)現(xiàn)為熱休克反應(yīng)抗炎癥的機(jī)制增添了新的內(nèi)容.在上述工作的基礎(chǔ)上,我們進(jìn)一步探索了熱休克反應(yīng)抑制IL-18基因表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制.我們用各種信號(hào)通路抑制劑預(yù)處理巨噬細(xì)胞后檢測(cè)IL-18的表達(dá)情況,結(jié)果表明JNK MAPK的抑制劑WP600
2、125以劑量依賴的方式抑制IL-18 mRNA的轉(zhuǎn)錄.為了驗(yàn)證熱休克反應(yīng)對(duì)IL-18的抑制與JNK失活的相關(guān)性,我們應(yīng)用Western blot和激酶分析檢查了熱休克反應(yīng)中JNK的活性.結(jié)果顯示,熱休克反應(yīng)降低了LPS誘導(dǎo)的JNK激酶及其下游底物c-Jun的磷酸化水平.IL-18基因的表達(dá)受到許多轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié).其中,AP-1對(duì)IL-18的表達(dá)起正調(diào)節(jié)作用,它結(jié)合到IL-18啟動(dòng)子上游-1120到-1083之間的TGA(C/G)TCA序
3、列上,調(diào)節(jié)-1120的表達(dá).AP-1是Jun同二聚體或Jun/Fos異二聚體復(fù)合物,是JNK激酶信號(hào)通路的下游底物.我們推測(cè)熱休克反應(yīng)引起JNK活性的下降可能導(dǎo)致AP-1 DNA結(jié)合活性的降低,運(yùn)用EMSA技術(shù)對(duì)細(xì)胞核中AP-1蛋白與IL-18啟動(dòng)子上DNA序列的結(jié)合能力進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果表明熱休克和JNK MAPK的抑制劑SP600125對(duì)JNK活性的抑制降低了AP-1與IL-18啟動(dòng)子上-1120到-1083的DNA序列的結(jié)合.這些結(jié)
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