短暫腦缺血再灌流后神經(jīng)細胞頓抑現(xiàn)象及其機制的研究.pdf

1、短暫腦缺血再灌流后神經(jīng)細胞頓抑現(xiàn)象及其機制的研究導(dǎo)師:張?zhí)K明教授博士研究生:鄧曉紅華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科前言近年來人們在研究心肌短暫缺血再灌流時，發(fā)現(xiàn)頓抑心肌的存在國際上OvergaardK.曾推測在腦缺血早期階段自發(fā)出現(xiàn)或者誘導(dǎo)發(fā)生的再灌流后可能出現(xiàn)“大腦頓抑，(Cerebralstunning)現(xiàn)象，即神經(jīng)元暫時性功能障礙而非死亡的現(xiàn)象。雖然，在國際上超早期溶栓治療急性腦梗塞的臨床試驗研究顯示有顯著的遠期療效:但

2、是，從現(xiàn)有的資料可以得知，即使病人在腦缺血起病六小時內(nèi)及時地進行溶栓治療，也并非所有的患者都能獲得很好的療效。有學(xué)者研究證實:與對照組相比，臨床上超早期溶栓再灌流24小時后，患者神經(jīng)功能恢復(fù)的評分，在統(tǒng)計學(xué)上并無顯著性差異，但3月后追蹤觀察兩組的療效時則有顯著性的差異，這與國際上大宗試驗的結(jié)果相似。而且在動物實驗研究中也有類似發(fā)現(xiàn):治療組在超早期對自體血栓大腦中動脈阻塞鼠進行尿激酶靜脈溶栓治療后，與未溶栓組動物比較，盡管缺血腦組織經(jīng)再灌

3、流后梗塞灶明顯減小，但兩組5小時及24小時神經(jīng)功能缺損評分均無顯著性差異，提示雖在缺血區(qū)重新恢復(fù)了灌流，但神經(jīng)功能并未很快恢復(fù)。由此可見，這種在短暫性缺血腦組織或在梗塞灶周邊半暗帶腦組織的再灌流損傷之后繼發(fā)出現(xiàn)的神經(jīng)功能延遲恢復(fù)的現(xiàn)象，極可能與一種以往未曾被充分認識到的病理生理學(xué)機制有關(guān)，值得腦卒中研究者高度重視，為此我們曾提出:超早期腦梗塞溶栓再灌流后的神經(jīng)功能恢復(fù)延遲現(xiàn)象的發(fā)生是否與缺血半暗帶區(qū)域內(nèi)的“神經(jīng)細胞頓抑”有關(guān)，應(yīng)該深入研

4、究和證實之。我們推測這種神經(jīng)細胞頓抑現(xiàn)象在細胞及亞細胞機制方面與心肌頓抑的發(fā)生機制有些異同，并且可能更為復(fù)雜。它的出現(xiàn)不僅可能與缺血再灌流后神經(jīng)元華功群攪大學(xué)何濟醫(yī)學(xué)脫厚士研男t華業(yè)老戈中文摘要、、、、、、灸咖究目的在于建立穩(wěn)定高表達綠色熒光蛋白(GFP，并能連續(xù)傳代的PC12GFP細胞株，研究GFP表達對轉(zhuǎn)染細胞有無毒性作用，摸索在流式細胞儀上經(jīng)GFPPI雙標分選GFP陽性活細胞并分析GFP陽性活細胞比例的方法。建立短暫缺氧血清剝奪復(fù)

5、氧復(fù)注血清后的神經(jīng)細胞頓抑模型，研究短暫缺氧血清剝奪復(fù)氧復(fù)注血清后有無神經(jīng)細胞頓抑現(xiàn)象存在及頓抑現(xiàn)象與能量代謝的關(guān)系及環(huán)抱菌素A對短暫缺氧血清剝奪復(fù)氧復(fù)注血清后的神經(jīng)細胞的保護作用，探討神經(jīng)細胞頓抑發(fā)生的可能機制及千預(yù)措施。法用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將pEGFPN、質(zhì)粒轉(zhuǎn)入PC12細胞，經(jīng)過G418篩選和克隆轉(zhuǎn)移，在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染細胞熒光表達通過比較普通PC12細胞和PC12GFP細胞的形態(tài)、細胞活性、細胞周期、細胞的凍存與復(fù)蘇及加入神經(jīng)生

6、長因子(NGF)后有無神經(jīng)樣突起長出等，進一步對PC12GFP細胞株進行鑒定并研究GFP表達對轉(zhuǎn)染細胞有無毒性作用。將缺氧血清剝奪復(fù)氧復(fù)注血清后的PC12GFP細胞進行PI標記，標記成功后在流式細胞儀上分選GFP陽性活細胞并分析GFP陽性活細胞比例，分選出GFP()PI()GFP()PI()GFP()PI亡)、GFP()PI()4組細胞，在倒置顯微鏡下觀察分選后各組細胞形態(tài)并在激光共聚焦顯微鏡下照相。將細胞隨機分為對照組和缺氧組，在流式