多重?zé)晒釶CR檢測(cè)未結(jié)合型高膽紅素血癥患者UGT1A1基因多態(tài)性的研究.pdf

1、[目的]：
　　本研究旨在建立一種多重?zé)晒釶CR方法對(duì)未結(jié)合型高膽紅素血癥患者尿苷二磷酸葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶1A1(uridine diphosphate glucuronosyltransferase1A1，UGT1A1)基因進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)，了解其突變情況，探討其突變類型與血清膽紅素水平的相關(guān)性，以及其運(yùn)用于臨床診斷Gilbert綜合征(Gilbert syndrome，GS)及Crigler-Najjar綜合征(Crigler

2、-Najjar syndrome，CNS)的意義。
　　[方法]：
　　1.收集251例未結(jié)合型高膽紅素血癥患者以及201例健康體檢者外周靜脈血3ml，用EDTA抗凝。
　　2.按照北京艾德萊公司提供的DNA提取試劑盒對(duì)收集的外周靜脈血進(jìn)行提取，-20度保存。
　　3.利用多重?zé)晒釶CR Tapman探針?lè)▽?duì)所提取的全血基因組UGT1A1基因A(TA)7TAA、Gly71Arg、Pro229Gln以及Try486

3、Asp四個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)分型。
　　4.用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離并回收。
　　5.利用T-A克隆法對(duì)回收產(chǎn)物進(jìn)行克隆擴(kuò)增。
　　6.采用測(cè)序法對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。
　　[結(jié)果]：
　　1.PCR產(chǎn)物電泳及測(cè)序結(jié)果與其基因檢測(cè)表型完全一致。
　　2.在251例未結(jié)合型高膽紅素血癥患者中，單一位點(diǎn)雜合子突變95例，單一位點(diǎn)純合子突變44例，多位點(diǎn)復(fù)合突變53例。在201例健康體檢者

4、中，單一位點(diǎn)雜合子突變75例，單一位點(diǎn)純合子突變5例，多位點(diǎn)復(fù)合突變7例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=80.89，P＜0.05)。
　　3.用spss19.0軟件經(jīng)卡方檢驗(yàn)分析，A(TA)7TAA、Gly71Arg和Pro229Gln的P值均小于0.01，其在高膽紅素組的突變率明顯高于對(duì)照組，而Try486Asp由于樣本量少，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.攜帶單一位點(diǎn)雜合突變患者的膽紅素水平低于攜帶多位點(diǎn)雜合復(fù)合突變患者的膽紅素水