雷公藤多苷對糖尿病大鼠腎臟巨噬細(xì)胞浸潤及NF-κB、MCP-1表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:
　　 本研究以高糖高脂飼養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)誘導(dǎo)的糖尿病大鼠為實(shí)驗(yàn)對象，以雷公藤多苷(Tripterygium Wilfordii PolyglucosideTWP)為治療藥物，探討不同劑量雷公藤多苷對糖尿病腎病的預(yù)防及早期治療對減少糖尿病腎病大鼠蛋白尿的療效，雷公藤多苷對腎臟巨噬細(xì)胞浸潤及相關(guān)細(xì)胞因子NF-κB、MCP-1表達(dá)的影響及可能的作用機(jī)制。
　　 方法:

2、>　　 清潔級雄性SD大鼠136只，隨機(jī)選取16只分為預(yù)防正常對照組（PNC組）、治療正常對照組（TNC組），每組8只，飼以常規(guī)飼料;其余120只大鼠以高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周聯(lián)合小劑量STZ(30mg/kg)尾靜脈注射建立T2DM模型，將成模大鼠隨機(jī)分為預(yù)防模型對照組（PDM組）、預(yù)防雷公藤多苷低劑量組(PTL組，6mg/kg)、預(yù)防雷公藤多苷中劑量組（PTM組，12mg/kg）、預(yù)防雷公藤多苷高劑量組（PTH組，24mg/kg）及治療

3、模型對照組（TDM組）、治療雷公藤多苷低劑量組（TTL組，6mg/kg）、治療雷公藤多苷中劑量組(TTM組，12mg/kg)、治療雷公藤多苷高劑量組（TTH組，24mg/kg），每組15只。預(yù)防組于DM成模后即開始灌胃，灌胃4周后處死;治療組于DM成模后第5周開始灌胃，第8周末處死;PNC、TNC組和PDM、TDM組以等量蒸餾水灌胃。觀察大鼠一般情況、血糖、腎重/體重、肝腎功能、血脂、血常規(guī)、24h尿蛋白的變化;光鏡、電鏡觀察腎臟病理及

4、超微結(jié)構(gòu)的變化;通過RT-PCR和免疫組化法分別從基因水平和蛋白水平探討細(xì)胞因子NF-κB、MCP-1在腎臟的表達(dá)情況，并通過RT-PCR及免疫組化法觀察巨噬細(xì)胞表面標(biāo)記蛋白CD68的表達(dá)情況，明確巨噬細(xì)胞及NF-κB、MCP-1在DN中的作用以及雷公藤多苷治療的影響和可能機(jī)制。
　　 結(jié)果:
　　 1.預(yù)防及治療組實(shí)驗(yàn)大鼠，與對照組相比，糖尿病模型大鼠均表現(xiàn)為血糖升高、體重下降、腎重/體重的比重增加(P＜0.05)，雷

5、公藤多苷干預(yù)治療后血糖及體重較糖尿病模型組無明顯變化，腎重/體重較模型組均有所降低，其中雷公藤多苷給藥中劑量組降低最明顯。
　　 2.肝腎功能:預(yù)防組實(shí)驗(yàn)大鼠中PTH組AST水平較PNC、PDM、PTL及PTM組明顯升高(P＜0.05)，各組間ALT、SCr、BUN水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，治療組實(shí)驗(yàn)大鼠中AST、ALT、SCr、BUN水平比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。血常規(guī):預(yù)防組實(shí)驗(yàn)大鼠中各組間WBC、RB

6、C、Hb、PLT、LYM、MONO及NEUT水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，治療組實(shí)驗(yàn)大鼠中雷公藤多苷給藥后各組的LYM水平均較TNC組下降(P＜0.05)，WBC、RBC、Hb、PLT、MONO及NEUT水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。血脂:高糖高脂飼料喂養(yǎng)組大鼠造模前TG、TC水平明顯高于PNC、TNC組(P＜0.05)，預(yù)防及治療組雷公藤多苷給藥各組TG、TC均較模型對照組有所降低(P＜0.05)，三組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(

7、P＞0.05)。
　　 3.24小時(shí)尿蛋白結(jié)果
　　 與PNC、TNC組相比，PDM、TDM組大鼠UMA明顯升高(P＜0.05);與PDM組相比，雷公藤多苷預(yù)防組干預(yù)后UMA有不同程度降低，其中PTM組下降最明顯(P＜0.05)，PTL組次之(P＜0.05)，PTH組降低不明顯(P＞0.05);與TDM組相比，雷公藤多苷治療組給藥后UMA均明顯降低(P＜0.05)，以TTM組下降最明顯。
　　 4.光鏡
　

8、　 4.1預(yù)防組:PNC組大鼠腎小球、腎小管及腎間質(zhì)未見明顯異常。PDM組大鼠可見腎小球輕度萎縮，系膜細(xì)胞輕度增生，腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，腎小管上皮細(xì)胞空泡及顆粒變性等DN的腎臟病理改變，雷公藤多苷干預(yù)后各組上述病理性改變均有所改善，其中PTM組改善最明顯。
　　 4.2治療組:TNC組大鼠腎小球、腎小管及腎間質(zhì)未見明顯異常。TDM組大鼠可見腎小球萎縮，系膜區(qū)彌漫性增寬，腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，腎小管上皮細(xì)胞空泡及顆粒變

9、性、間質(zhì)可見多量纖維組織灶性增生等DN的腎臟病理改變。雷公藤多苷給藥后各組上述病理性改變均有所改善，其中TTM組改善最明顯。
　　 5.電鏡
　　 5.1預(yù)防組:PNC組腎小球及腎小管均未見異常。PDM組腎小球基底膜增厚，足突融合，足細(xì)胞膜破裂;腎小管基底膜增厚斷裂，線粒體擴(kuò)張、嵴斷裂。雷公藤多苷干預(yù)后，上述病理改變均較PDM組減輕，其中PTM組病理改變減輕最明顯。
　　 5.2治療組:TNC組腎小球及腎小管均未

10、見異常。TDM組大鼠腎小球基底膜明顯增厚，足突融合，足細(xì)胞細(xì)胞膜破裂;腎小管基底膜不規(guī)則增厚，線粒體嵴斷裂，結(jié)構(gòu)模糊，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)見大量吞飲泡(Pt)，細(xì)胞膜邊界不清。雷公藤多苷給藥后，上述病理改變均較TDM組減輕，其中TTM組病理改變減輕最明顯。
　　 6.免疫組化及RT-PCR: CD68、NF-κB、MCP-1在腎小球及腎小管中均有表達(dá)，CD68主要表達(dá)于腎小球區(qū)域，NF-κB及MCP-1主要表達(dá)于腎小管區(qū)域。
　　

11、6.1預(yù)防組:與PNC組相比，PDM組CD68、NF-κB、MCP-1蛋白及基因表達(dá)水平明顯升高(P＜0.05)。與PDM組相比，雷公藤多苷干預(yù)各組CD68、NF-κB、MCP-1表達(dá)水平下降(P＜0.05)，其中PTM組下降最明顯。
　　 6.2治療組:與TNC組相比，TDM組CD68、NF-κB、MCP-1蛋白及基因表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。與TDM組相比，雷公藤多苷給藥各組CD68、NF-κB、MCP-1表達(dá)水平下

12、降(P＜0.05)，其中TTM組下降最明顯。
　　 結(jié)論:
　　 1.成功制備DN模型，血糖、血脂水平、24h尿蛋白特點(diǎn)及腎臟病理變化符合人類T2DM及DN的特點(diǎn)及病理變化。
　　 2.預(yù)防性給予雷公藤多苷藥物干預(yù)可有效延緩DN的發(fā)生發(fā)展，DN早期及時(shí)給予雷公藤多苷治療，可減少24h尿蛋白，有效延緩DN的進(jìn)展。
　　 3.應(yīng)用低、中劑量雷公藤多苷能夠預(yù)防和治療早期DN，具有較高安全性，雷公藤多苷高劑量（2