山荊子多酚分離鑒定及對γ輻射誘導(dǎo)氧化損傷的防護作用.pdf

1、電離輻射能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，破壞機體的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，造成機體的抗氧化防御系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及胃腸功能等的嚴重損傷，甚至導(dǎo)致遺傳突變及引發(fā)癌癥。因此，尋找能夠降低氧化損傷、提升免疫活性，且高效無毒的天然輻射防護物質(zhì)成為研究熱點。本論文以山荊子多酚（Polyphenols from Malus baccata(Linn.) Borkh.，MBP）作為研究對象，采用不同溶劑進行分離并獲得抗氧化活性最優(yōu)組分丙酮提取物MBP-3，對其分離及純

2、化工藝進行研究，并對活性最強的梯度40％乙醇洗脫物MBP-3b進行組成分析及結(jié)構(gòu)鑒定；系統(tǒng)的研究了MBP-3b對輻射誘導(dǎo)機體氧化損傷的防護作用途徑及作用機制。
　　采用四種不同極性的溶劑（水、乙醇、丙酮和乙酸乙酯）分別提取獲得山荊子多酚MBP-1~4四個組分，對多酚類化合物含量進行分析，并在體外建立不同抗氧化體系，研究 MBP的體外抗氧化活性和脂質(zhì)過氧化抑制活性。結(jié)果表明山荊子丙酮提取物MBP-3的總酚、黃酮和花色苷含量最高；四種

3、MBP均能不同程度的清除非生理性和生理性自由基，并具有顯著的總還原能力及脂質(zhì)過氧化抑制能力，其中MBP-3的抗氧化活性最為顯著，說明MBP-3具有更有效的供電子及供氫能力，能夠終止自由基鏈式反應(yīng)、降低氧化應(yīng)激從而抑制脂質(zhì)過氧化的發(fā)生。
　　采用超聲輔助提取方法分離山荊子多酚，通過響應(yīng)面法優(yōu)化得到山荊子多酚最佳提取工藝為：丙酮作為提取溶液，液料比13：1，提取溫度47℃和超聲功率330W，在最優(yōu)條件下所得山荊子多酚含量為1170.4

4、5±28.15 mg GAE/100g；大孔樹脂NKA-9層析純化MBP-3最優(yōu)條件為上樣體積1/5 BV，上樣流速1.5 BV/h，洗脫流速2.0 BV/h，動態(tài)梯度洗脫下40%（v/v）乙醇洗脫物MBP-3b總酚含量最高，且抗氧化活性最強。
　　采用UPLC-Q-TOF-MS，結(jié)合UV-Vis及FT-IR光譜對MBP-3b進行組成分析和結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MBP-3b主要由十種多酚化合物組成，分別為飛燕草素3,5-二葡萄糖苷、矢

5、車菊-3-葡萄糖苷、綠原酸、原花青素 C1、槲皮素-3-半乳糖苷、槲皮素-3-葡萄糖苷、槲皮素-3-木糖苷/阿拉伯糖苷、根皮素-2-木糖葡萄糖苷、槲皮素-3-鼠李糖苷和根皮苷，相對質(zhì)量百分含量分別為3.60%、9.29%、11.96%、1.64%、18.74%、6.63%、4.75%、7.16%、4.32%和18.24%。
　　在體外建立60Coγ輻射誘導(dǎo)脾細胞和外周血白細胞氧化損傷模型，通過對輻射后脾細胞的存活率、脾細胞內(nèi)氧化還

6、原狀態(tài)、外周血白細胞形態(tài)、脾細胞DNA的損傷以及脾細胞內(nèi)ROS的含量進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MBP-3b能夠顯著的降低輻射后外周血中異形白細胞的數(shù)量，并能通過促進脾細胞內(nèi)抗氧化酶SOD、CAT的活性，降低細胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生，從而有效的抑制胞內(nèi)ROS的生成，降低細胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)的進程而抑制了DNA的損傷，提高了輻射條件下脾細胞存活率。
　　建立60Coγ輻射誘導(dǎo)小鼠氧化損傷模型，通過分析輻射后小鼠DNA損傷、免疫功能、抗氧

7、化防御系統(tǒng)活性來研究MBP-3b對小鼠的輻射防護作用途徑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MBP-3b能夠通過提高機體免疫功能，促進機體酶促（SOD、CAT、GSH-Px及GST）及非酶促（T-AOC、GSH）抗氧化防御系統(tǒng)功能，降低輻射后機體的脂質(zhì)過氧化發(fā)生，從而有效抑制輻射后小鼠骨髓微核及染色體畸變的發(fā)生，對輻射誘導(dǎo)的小鼠機體氧化損傷具有防護作用。
　　通過對輻射條件下小鼠小腸及脾臟形態(tài)學(xué)及細胞凋亡進行研究，結(jié)果表明， MBP-3b能夠緩解電離輻射

8、誘導(dǎo)的小鼠小腸及脾臟組織病變，抑制免疫細胞的大量凋亡；通過免疫組化方法對小鼠脾細胞線粒體凋亡信號途徑相關(guān)蛋白表達進行研究，結(jié)果表明MBP-3b能夠有效抑制促凋亡Bax蛋白表達，促進抗凋亡蛋白 Bcl-2的表達，從而抑制了細胞色素 c的釋放及 Caspases-3活性亞基的表達，對輻射引起的脾細胞凋亡具有明顯的抑制作用。
　　本課題研究表明山荊子多酚MBP-3b作為一種抗氧化組分，能夠有效的促進機體酶促及非酶抗氧化防御系統(tǒng)功能，抑制