西羅莫司對人子宮內膜癌KLE細胞增殖及HIF-1a、mTOR基因及蛋白表達抑制作用的研究.pdf

1、目的：研究西羅莫司對體外缺氧培養(yǎng)的人子宮內膜癌細胞系KLE細胞增殖及HIF-1a、mTOR基因及蛋白表達的抑制效應，討論以mTOR蛋白為作用靶點治療子宮內膜癌可能的細胞內信號傳導機制。
　　方法：用氯化鈷誘導子宮內膜腺癌KLE細胞模擬缺氧微環(huán)境，外源性給予不同濃度的西羅莫司分別作用于細胞24小時,48小時后，采用CCK-8法檢測KLE細胞活性變化。采用實時熒光定量PCR（Real-time PCR）法檢測西羅莫司對KLE細胞HIF

2、-1a、mTOR基因表達的影響。采用免疫熒光技術檢測不同濃度西羅莫司對KLE細胞內HIF-1a、mTOR蛋白的變化。
　　結果：⑴西羅莫司可顯著抑制缺氧條件下人子宮內膜癌 KLE細胞的增殖，其抑制率與藥物濃度呈劑量依賴性關系，而且48小時比24小時存活率低；10000nmol／L西羅莫司分別作用24小時和48小時后，缺氧條件下KLE細胞的存活率分別低至12％和9%。⑵在西羅莫司的干預下，隨著藥物作用濃度的增加，KLE細胞中mTOR

3、和HIF-1α mRNA和蛋白表達水平均呈下降趨勢，在其濃度最大組抑制效應達到最大，實驗處理組與對照組比較，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。⑶HIF-1α蛋白主要定位在細胞核，而mTOR蛋白在細胞質及細胞核均有分布。其中在常氧對照組中HIF-1α蛋白表達檢測率較低，但在缺氧處理后 HIF-α表達顯著升高且有表達聚集的現(xiàn)象；mTOR蛋白在缺氧對照組細胞內的表達與常氧對照組相比無明顯差異；與缺氧對照組比較，缺氧加藥組隨著西羅莫司濃度增