RRM2 siRNA聯(lián)合華蟾素對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用.pdf

1、研究目的：探討RRM2siRNA聯(lián)合華蟾素對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 研究方法：設(shè)計(jì)針對(duì)RRM2基因的小干擾RNA（siRNA），采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將siRNA片段導(dǎo)入Ishikawa細(xì)胞中。將Ishikawa細(xì)胞分為空白對(duì)照組、N-siRNA轉(zhuǎn)染組、siRNA轉(zhuǎn)染組、siRNA轉(zhuǎn)染+華蟾素組，用MTT法檢測(cè)siRNA聯(lián)合不同濃度華蟾素對(duì)細(xì)胞增殖的影響；將Ishikawa細(xì)胞

2、分為空白對(duì)照組、N-siRNA轉(zhuǎn)染組、siRNA轉(zhuǎn)染組、siRNA轉(zhuǎn)染+2mg/ml華蟾素組，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染率、凋亡率及細(xì)胞周期分布情況；采用半定量RT-PCR和Western blotting分別檢測(cè)RRM2在mRNA和蛋白水平上表達(dá)的變化，用Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞體外侵襲能力。 研究結(jié)果：所設(shè)計(jì)的siRNA能有效地抑制Ishikawa細(xì)胞的增殖，聯(lián)合華蟾素后其抑制作用增強(qiáng)，但以2mg/ml濃度最佳；RRM2

3、siRNA與華蟾素聯(lián)合作用后，對(duì)凋亡的誘導(dǎo)也有增強(qiáng)作用，siRNA轉(zhuǎn)染組、2mg/ml華蟾素及siRNA轉(zhuǎn)染+2mg/ml華蟾素凋亡率分別為44.3％、42.0％、71.1％；與空白對(duì)照組比較，siRNA和華蟾素聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞周期的影響表現(xiàn)為G1期細(xì)胞顯著增加，G2和S期細(xì)胞比率明顯減少；siRNA聯(lián)合華蟾素還可顯著下調(diào)RRM2在mRNA及蛋白水平上的表達(dá)，降低細(xì)胞侵襲力，而作為對(duì)照的錯(cuò)義序列N-siRNA轉(zhuǎn)染組則沒有上述效應(yīng)。