RRM2 siRNA聯(lián)合華蟾素對子宮內膜癌Ishikawa細胞的生長抑制作用.pdf

1、研究目的：探討RRM2siRNA聯(lián)合華蟾素對子宮內膜癌Ishikawa細胞生長的影響。 研究方法：設計針對RRM2基因的小干擾RNA（siRNA），采用陽離子脂質體LipofectamineTM2000將siRNA片段導入Ishikawa細胞中。將Ishikawa細胞分為空白對照組、N-siRNA轉染組、siRNA轉染組、siRNA轉染+華蟾素組，用MTT法檢測siRNA聯(lián)合不同濃度華蟾素對細胞增殖的影響；將Ishikawa細胞

2、分為空白對照組、N-siRNA轉染組、siRNA轉染組、siRNA轉染+2mg/ml華蟾素組，用流式細胞術檢測細胞轉染率、凋亡率及細胞周期分布情況；采用半定量RT-PCR和Western blotting分別檢測RRM2在mRNA和蛋白水平上表達的變化，用Transwell小室檢測細胞體外侵襲能力。 研究結果：所設計的siRNA能有效地抑制Ishikawa細胞的增殖，聯(lián)合華蟾素后其抑制作用增強，但以2mg/ml濃度最佳；RRM2

3、siRNA與華蟾素聯(lián)合作用后，對凋亡的誘導也有增強作用，siRNA轉染組、2mg/ml華蟾素及siRNA轉染+2mg/ml華蟾素凋亡率分別為44.3％、42.0％、71.1％；與空白對照組比較，siRNA和華蟾素聯(lián)合作用對細胞周期的影響表現(xiàn)為G1期細胞顯著增加，G2和S期細胞比率明顯減少；siRNA聯(lián)合華蟾素還可顯著下調RRM2在mRNA及蛋白水平上的表達，降低細胞侵襲力，而作為對照的錯義序列N-siRNA轉染組則沒有上述效應。