經(jīng)眶下神經(jīng)注射蛇毒建立新型大鼠三叉神經(jīng)痛模型.pdf

1、研究背景: 三叉神經(jīng)痛被稱為人類最大的痛苦之一，臨床治療手段雖然不少，但尚無(wú)一種公認(rèn)的理想手段，其主要原因是三叉神經(jīng)痛發(fā)病機(jī)制尚未闡明。目前已有的中樞性病源學(xué)說(shuō)、周圍性病源學(xué)說(shuō)、血管壓迫學(xué)說(shuō)等都不能完整地解釋該病臨床現(xiàn)象。三叉神經(jīng)痛機(jī)制的研究障礙之一是缺乏一個(gè)理想的動(dòng)物模型，以往用于研究三叉神經(jīng)痛的腦閂下蛛網(wǎng)膜下腔注射微量青霉素G-K引起大鼠三叉神經(jīng)痛樣反應(yīng)模型、慢性壓迫性損傷大鼠眶下神經(jīng)模型及貓去牙髓模型等均有操作復(fù)雜、特異性不高等缺

2、點(diǎn)，為此建立一種簡(jiǎn)便、易行且可靠的動(dòng)物模型實(shí)屬必要。
　　目的: 建立一種簡(jiǎn)便、易行、可靠的三叉神經(jīng)痛動(dòng)物模型。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)1選取Wistar大鼠20只，隨機(jī)分為兩組，沿眉弓上緣做弧形切口，顯露位于眶內(nèi)側(cè)底部的眶下神經(jīng)，予大鼠眶下神經(jīng)干內(nèi)注射蛇毒（濃度為0.1mg·l-1）或生理鹽水6ul。于術(shù)前3天以及術(shù)后3、6、9、12、15、20、25、30、40、50、60、70、80以及90天進(jìn)行機(jī)械痛閾行為學(xué)測(cè)定

3、。觀察大鼠眶下神經(jīng)支配區(qū)域?qū)C(jī)械刺激的疼痛反應(yīng)閾值及疼痛行為學(xué)表現(xiàn)。
　　實(shí)驗(yàn)2選取Wistar大鼠30只，分別為蛇毒注射組20只和對(duì)照組10只，沿眉弓上緣做弧形切口，顯露位于眶內(nèi)側(cè)底部的眶下神經(jīng)，予大鼠眶下神經(jīng)干內(nèi)注射蛇毒（濃度為0.1mg·l-1）或生理鹽水6ul。于術(shù)前3天以及術(shù)后3、7、14天進(jìn)行視頻行為學(xué)測(cè)定。攝像機(jī)放置在籠子前面1米處觀察大鼠探究行為、靜止行為、抓臉行為、搖頭行為、舔后肢行為和舔身體行為的次數(shù)和時(shí)間。<

4、br>　　實(shí)驗(yàn)3選取Wistar大鼠4只，分為蛇毒注射組和對(duì)照組各兩只。按照實(shí)驗(yàn)1的方法制作蛇毒三叉神經(jīng)痛模型。取大鼠延髓和眶下神經(jīng)組織，制作電鏡切片，觀察電鏡下延髓和眶下神經(jīng)組織。
　　實(shí)驗(yàn)4選取Wistar大鼠2只，一側(cè)股靜脈推注5％伊文氏藍(lán)染料，待大鼠全身轉(zhuǎn)藍(lán)約幾分鐘后，予ION神經(jīng)鞘膜內(nèi)注入蛇毒毒液或生理鹽水，觀察ION支配區(qū)域血管通透性以伊文氏藍(lán)漏出量。
　　實(shí)驗(yàn)5選取實(shí)驗(yàn)2中制作完成蛇毒模型組大鼠16只，隨機(jī)分為

5、喂藥組和對(duì)照組，每組8只。普瑞巴林喂藥組采取灌胃法，藥物用生理鹽水溶解，每只灌注量為30mg/kg，連續(xù)灌注6天，對(duì)照組不做任何處理。喂藥前1天以及喂藥后第1、2、3、4、5、6、14天進(jìn)行行為學(xué)測(cè)定。攝像機(jī)放置在籠子前面1米處觀察大鼠探究行為、靜止行為、抓臉行為、搖頭行為、舔后肢行為、舔身體行為的次數(shù)和時(shí)間。
　　結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)組大鼠于術(shù)后3天出現(xiàn)眶下神經(jīng)支配區(qū)域機(jī)械痛反應(yīng)閾值與術(shù)前及對(duì)照組相比明顯降低(P＜0.01

6、)，大鼠易激惹，具有搔抓面部或攻擊行為。機(jī)械痛閾值降低持續(xù)至術(shù)后60天，此后逐漸恢復(fù)，術(shù)后90天完全恢復(fù)同術(shù)前。
　　2、實(shí)驗(yàn)組大鼠于術(shù)后3天出現(xiàn)探究行為、靜止行為、抓臉行為、搖頭行為的變化，與術(shù)前及對(duì)照組相比上述行為變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，舔后肢、舔身體行為無(wú)明顯變化。大鼠術(shù)后7天、14天探究行為、靜止行為、抓臉行為、搖頭行為變化進(jìn)一步明顯，與術(shù)前及對(duì)照組相比上述行為變化均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。舔后肢、舔身體行

7、為與術(shù)前及對(duì)照組相比上述行為變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、實(shí)驗(yàn)組延髓神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)髓鞘松解、脫髓鞘改變，同時(shí)出現(xiàn)軸索密度分布不均勻改變。實(shí)驗(yàn)組眶下神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)髓鞘松解、脫髓鞘改變。
　　4、予大鼠眶下神經(jīng)干鞘膜內(nèi)注射蛇毒15分鐘后，圍繞鼻區(qū)的口唇部出現(xiàn)藍(lán)色斑塊，伊文氏藍(lán)滲出明顯，對(duì)照組則幾乎無(wú)伊文氏藍(lán)滲出。
　　5、普瑞巴林組大鼠于喂藥后第1天出現(xiàn)抓臉行為、搖頭行為的變化，與術(shù)前及對(duì)照組相比上述行為變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，探究行

8、為、靜止行為、舔后肢、舔身體行為無(wú)顯著改變。普瑞巴林組大鼠于喂藥后第2天出現(xiàn)抓臉、搖頭、靜止行為的變化，與術(shù)前及對(duì)照組相比上述行為變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，探究行為、舔后肢、舔身體行為無(wú)明顯變化。普瑞巴林組大鼠于喂藥后第3天出現(xiàn)抓臉、搖頭、靜止行為、探究行為的變化，與術(shù)前及對(duì)照組相比上述行為變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），舔后肢、舔身體行為無(wú)顯著改變。普瑞巴林組大鼠于喂藥后第4、5、6、14天均出現(xiàn)抓臉、搖頭、靜止行為、探究行