UT-B基因敲除小鼠發(fā)生進(jìn)展型房室傳導(dǎo)阻滯機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的：鑒定UT-B基因敲除(UT-B -/-)和UT-B野生型(UT-B+/+)小鼠，檢測(cè)小鼠心臟UT-B基因以及蛋白的表達(dá)；初步探討UT-B基因敲除對(duì)小鼠心臟發(fā)生進(jìn)展型房室傳導(dǎo)阻滯的機(jī)制。 方法：基因型鑒定：鼠尾提取基因組DNA，PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳鑒定小鼠基因型； UT-B -/-、UT-B+/+小鼠生物學(xué)特性的比較：應(yīng)用2 mol/L尿素溶血試驗(yàn)觀察紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；應(yīng)用RT-PCR、western blot方法，檢

2、測(cè)心臟UT-B的mRNA與蛋白的表達(dá)。對(duì)比觀察6 w、16 w、52 w的UT-B-/-、UT-B+/+小鼠的肢體Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)心電圖的差異；應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)Bcl-2和VDAC的mRNA的表達(dá)；應(yīng)用比色法和硝酸還原酶法檢測(cè)MDA的含量、SOD的活力、NO的含量。 結(jié)果：基因組DNA的PCR電泳結(jié)果顯示，擴(kuò)增產(chǎn)物在280bp處為UT-B-/-小鼠，在400bp為UT-B+/+小鼠，在280bp和400bp處均有擴(kuò)增產(chǎn)物的為U

3、T-B+/-小鼠。UT-B+/-后代UT-B-/-、UT-B+/+、UT-B+/-基因型的比例為1：1：2，符合孟德爾遺傳定律。UT-B-/-小鼠的紅細(xì)胞加入2 mol/L尿素中立即發(fā)生皺縮，而后逐漸膨脹，直至10 min大部分紅細(xì)胞溶血。而UT-B+/+小鼠的紅細(xì)胞加入2mol/L尿素中立即溶血，二者間差異顯著，肉眼觀察就有明顯差異，與基因型鑒定結(jié)果相符合。RT-PCR電泳結(jié)果顯示：UT-B+/+小鼠心臟的心肌細(xì)胞有UT-B mRNA

4、的表達(dá)，而UT-B-/-小鼠心臟沒有UT-B mRNA的表達(dá)。wstern blot結(jié)果顯示UT-B+/+小鼠心臟組織有45kD左右的UT-B蛋白表達(dá)。通過體表心電圖檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)6w、16w和52w齡組UT-B-/-小鼠的Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)心電圖的P-R間期(43.5±4.2ms，45.5±6.9 ms，43.8±7.6 ms)明顯長于UT-B+/+小鼠(38.6±2.9 ms，38.7±5.6 ms，38.2±7.3 ms，p<0.05)，隨增

5、齡P-R間期無明顯延長，但老齡組UT-B-/-小鼠(52 w)Ⅱ度和Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯發(fā)現(xiàn)率超過20％。UT-B-/-小鼠和UT-B +/+小鼠心臟組織Bcl-2 mRNA的表達(dá)沒有明顯的差異； UT-B-/-小鼠心臟VDAC mRNA的表達(dá)要明顯低于UT-B+/+小鼠。應(yīng)用比色法和硝酸還原酶法檢測(cè)UT-B-/-小鼠和UT-B+/+小鼠心臟的MDA和NO含量以及T-SOD的活力，成年UT-B-/-小鼠NO的含量以及T-SOD的活力要明顯低

6、于成年UT-B+/+小鼠的，而成年UT-B-/-小鼠MDA的含量要明顯高于成年UT-B+/+小鼠的。 結(jié)論：建立以基因DNA-PCR和2 mol/L尿素溶血試驗(yàn)為基礎(chǔ)的小鼠UT-B基因型鑒定系統(tǒng)；UT-B+/+小鼠的心肌細(xì)胞有UT-B mRNA與蛋白表達(dá)，而UT-B-/-小鼠均呈陰性表達(dá)；體表心電圖顯示UT-B-/-小鼠發(fā)生了進(jìn)展型房室傳導(dǎo)阻滯；UT-B基因敲除小鼠的心臟VDAC的mRNA表達(dá)降低可能是導(dǎo)致其發(fā)生進(jìn)展型房室傳導(dǎo)阻