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1、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS)將HPLC的高分離效能與MS的強(qiáng)大結(jié)構(gòu)測(cè)定功能組合起來,既具備強(qiáng)大的分離能力,又具有質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度以及提供準(zhǔn)確分子質(zhì)量和豐富結(jié)構(gòu)信息的特性,已成為藥物研究中最重要的分析手段之一。
藥物代謝動(dòng)力學(xué)是新藥研發(fā)中的重要部分,通過藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究,對(duì)闡明藥物療效的物質(zhì)基礎(chǔ)及藥理毒理學(xué)機(jī)制具有重要指導(dǎo)意義。HPLC-MS技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)多組分的同時(shí)檢測(cè),正符合藥代動(dòng)力學(xué)需要對(duì)原藥和代
2、謝物同時(shí)分析的特點(diǎn),具有重要意義。
老年癡呆癥已成為當(dāng)今社會(huì)威脅老年人健康的嚴(yán)重疾病之一。為了治療此類疾病已有一系列的促智類藥物被開發(fā)并投放市場(chǎng)。但由于此類疾病的病因和發(fā)病機(jī)制尚不十分明確,同時(shí)現(xiàn)有藥物在病灶聚集量亦有限。因此,在原有促智類藥物研究基礎(chǔ)上,以中醫(yī)理論為指導(dǎo),在中藥中尋找促智活性成分,已經(jīng)成為促智藥物研究的重要方向,并已取得了一定的成果。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)數(shù)種生物活性強(qiáng),藥理作用明顯的中藥化學(xué)組分,有望作為新藥進(jìn)行研發(fā)
3、。左旋黃皮酰胺和人參皂苷Rg1是其中的兩個(gè)典型代表。
左旋黃皮酰胺((-)-Clausenmaide)是從黃皮葉水浸膏中分離得到的一種活性成分,具有腦保護(hù)和促智的藥理活性,現(xiàn)已進(jìn)入臨床研究。人參皂苷Rg1是從五加科植物人參(PanaxginsengC.A.Mey)的干燥根中提取的原人參三醇型皂苷,具有促智的生物活性。上述兩種中藥促智活性成分進(jìn)一步的深入研究需要代謝學(xué)依據(jù)的提供,因此有必要采用適當(dāng)?shù)姆治鍪侄螌?duì)這兩種中藥促智活
4、性成分的體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化規(guī)律進(jìn)行考察,并對(duì)原藥及代謝物的排泄途徑進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
本課題擬采用HPLC-MS技術(shù)對(duì)左旋黃皮酰胺體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化進(jìn)行研究,并對(duì)人參皂苷Rg1的體內(nèi)代謝排泄情況進(jìn)行定量分析。具體研究?jī)?nèi)容如下:
第一部分,左旋黃皮酰胺在大鼠體內(nèi)的代謝轉(zhuǎn)化研究
目的:建立液相色譜-電噴霧-離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜法(LC-ESI-IT-TOF),分離檢測(cè)左旋黃皮酰胺在SD大鼠尿液、糞便中的代謝產(chǎn)物。
5、> 方法:色譜柱為AlltimaC18(4.6×250mm,5μm),流動(dòng)相水相為0.1%(v/v)氨水溶液;有機(jī)相為乙腈,梯度洗脫,質(zhì)譜采用電噴霧離子源(ESI)。以左旋黃皮酰胺對(duì)照品對(duì)色譜及質(zhì)譜條件進(jìn)行優(yōu)化,分析總結(jié)了其電噴霧質(zhì)譜的一級(jí)電離規(guī)律和多級(jí)質(zhì)譜裂解規(guī)律,以此作為左旋黃皮酰胺大鼠體內(nèi)代謝物分離檢測(cè)的依據(jù)。大鼠以150mg/kg劑量灌胃給予大鼠左旋黃皮酰胺,并收集0~36h的尿樣和糞便,經(jīng)適當(dāng)處理后采用LC-ESI-IT
6、-TOF方法進(jìn)行測(cè)定。
結(jié)果:根據(jù)生物體內(nèi)藥物代謝轉(zhuǎn)化規(guī)律及母體藥物裂解規(guī)律,在大鼠體內(nèi)檢測(cè)出左旋黃皮酰胺的8種代謝產(chǎn)物。其中尿液中檢出了8個(gè)代謝物其中兩種為Ⅱ相代謝產(chǎn)物,其余為Ⅰ相代謝產(chǎn)物;糞便中檢出了4個(gè)代謝物,均為Ⅰ相代謝產(chǎn)物。
結(jié)論:本文建立了靈敏度高,專屬性好的液相色譜-電噴霧-離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜法,分離分析了大鼠尿液及糞便中左旋黃皮酰胺的8種代謝產(chǎn)物。
第二部分,UHPLC-MS/
7、MS法研究人參皂苷Rg1在大鼠體內(nèi)代謝和排泄
目的:建立一種同時(shí)測(cè)定大鼠膽汁、糞便和尿液中的人參皂苷Rg1及其主要代謝物Rh1及Ppt的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(UHPLC-MS/MS),并用于考察灌胃給予大鼠人參皂苷Rg1后代謝及排泄情況。
方法:采用Shim-PackXR-ODSⅡ色譜柱(75mm×2mm,2.3μm);流動(dòng)相為0.05%甲酸水溶液(A)—0.05%甲酸乙腈溶液(B)進(jìn)行梯度洗脫;流速為0
8、.5mL/min;檢測(cè)器為三重四級(jí)桿檢測(cè)器;在多反應(yīng)檢測(cè)模式(MRM)下用于定量檢測(cè)的離子反應(yīng)對(duì)分別為Rg1(m/z):621.40-405.45;Rh1(m/z):621.40-441.40;Ppt(m/z):441.20-123.20;內(nèi)標(biāo)丙酸睪酮(m/z):345.10-97.10。大鼠以25mg·kg-1劑量灌胃給予Rg1,經(jīng)適當(dāng)處理后采用UHPLC-MS/MS方法進(jìn)行測(cè)定。
結(jié)果:UHPLC-MS/MS測(cè)定方法的
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