HPLC-MS技術(shù)研究中藥促智成分的代謝轉(zhuǎn)化和代謝排泄.pdf

1、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS)將HPLC的高分離效能與MS的強大結(jié)構(gòu)測定功能組合起來，既具備強大的分離能力，又具有質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度以及提供準(zhǔn)確分子質(zhì)量和豐富結(jié)構(gòu)信息的特性，已成為藥物研究中最重要的分析手段之一。
　　 藥物代謝動力學(xué)是新藥研發(fā)中的重要部分，通過藥物代謝動力學(xué)研究，對闡明藥物療效的物質(zhì)基礎(chǔ)及藥理毒理學(xué)機制具有重要指導(dǎo)意義。HPLC-MS技術(shù)可以實現(xiàn)對多組分的同時檢測，正符合藥代動力學(xué)需要對原藥和代

2、謝物同時分析的特點，具有重要意義。
　　 老年癡呆癥已成為當(dāng)今社會威脅老年人健康的嚴(yán)重疾病之一。為了治療此類疾病已有一系列的促智類藥物被開發(fā)并投放市場。但由于此類疾病的病因和發(fā)病機制尚不十分明確，同時現(xiàn)有藥物在病灶聚集量亦有限。因此，在原有促智類藥物研究基礎(chǔ)上，以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，在中藥中尋找促智活性成分，已經(jīng)成為促智藥物研究的重要方向，并已取得了一定的成果?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)數(shù)種生物活性強，藥理作用明顯的中藥化學(xué)組分，有望作為新藥進行研發(fā)

3、。左旋黃皮酰胺和人參皂苷Rg1是其中的兩個典型代表。
　　 左旋黃皮酰胺((-)-Clausenmaide）是從黃皮葉水浸膏中分離得到的一種活性成分，具有腦保護和促智的藥理活性，現(xiàn)已進入臨床研究。人參皂苷Rg1是從五加科植物人參(PanaxginsengC.A.Mey)的干燥根中提取的原人參三醇型皂苷，具有促智的生物活性。上述兩種中藥促智活性成分進一步的深入研究需要代謝學(xué)依據(jù)的提供，因此有必要采用適當(dāng)?shù)姆治鍪侄螌@兩種中藥促智活

4、性成分的體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化規(guī)律進行考察，并對原藥及代謝物的排泄途徑進行監(jiān)測。
　　 本課題擬采用HPLC-MS技術(shù)對左旋黃皮酰胺體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化進行研究，并對人參皂苷Rg1的體內(nèi)代謝排泄情況進行定量分析。具體研究內(nèi)容如下:
　　 第一部分，左旋黃皮酰胺在大鼠體內(nèi)的代謝轉(zhuǎn)化研究
　　 目的:建立液相色譜-電噴霧-離子阱-飛行時間質(zhì)譜法(LC-ESI-IT-TOF)，分離檢測左旋黃皮酰胺在SD大鼠尿液、糞便中的代謝產(chǎn)物。

5、>　　 方法:色譜柱為AlltimaC18(4.6×250mm，5μm)，流動相水相為0.1％(v/v)氨水溶液;有機相為乙腈，梯度洗脫，質(zhì)譜采用電噴霧離子源(ESI)。以左旋黃皮酰胺對照品對色譜及質(zhì)譜條件進行優(yōu)化，分析總結(jié)了其電噴霧質(zhì)譜的一級電離規(guī)律和多級質(zhì)譜裂解規(guī)律，以此作為左旋黃皮酰胺大鼠體內(nèi)代謝物分離檢測的依據(jù)。大鼠以150mg/kg劑量灌胃給予大鼠左旋黃皮酰胺，并收集0～36h的尿樣和糞便，經(jīng)適當(dāng)處理后采用LC-ESI-IT

6、-TOF方法進行測定。
　　 結(jié)果:根據(jù)生物體內(nèi)藥物代謝轉(zhuǎn)化規(guī)律及母體藥物裂解規(guī)律，在大鼠體內(nèi)檢測出左旋黃皮酰胺的8種代謝產(chǎn)物。其中尿液中檢出了8個代謝物其中兩種為Ⅱ相代謝產(chǎn)物，其余為Ⅰ相代謝產(chǎn)物;糞便中檢出了4個代謝物，均為Ⅰ相代謝產(chǎn)物。
　　 結(jié)論:本文建立了靈敏度高，專屬性好的液相色譜-電噴霧-離子阱-飛行時間質(zhì)譜法，分離分析了大鼠尿液及糞便中左旋黃皮酰胺的8種代謝產(chǎn)物。
　　 第二部分，UHPLC-MS/

7、MS法研究人參皂苷Rg1在大鼠體內(nèi)代謝和排泄
　　 目的:建立一種同時測定大鼠膽汁、糞便和尿液中的人參皂苷Rg1及其主要代謝物Rh1及Ppt的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UHPLC-MS/MS），并用于考察灌胃給予大鼠人參皂苷Rg1后代謝及排泄情況。
　　 方法:采用Shim-PackXR-ODSⅡ色譜柱(75mm×2mm，2.3μm);流動相為0.05％甲酸水溶液(A)—0.05％甲酸乙腈溶液(B)進行梯度洗脫;流速為0

8、.5mL/min;檢測器為三重四級桿檢測器;在多反應(yīng)檢測模式（MRM）下用于定量檢測的離子反應(yīng)對分別為Rg1（m/z）:621.40-405.45;Rh1(m/z):621.40-441.40;Ppt(m/z):441.20-123.20;內(nèi)標(biāo)丙酸睪酮（m/z）:345.10-97.10。大鼠以25mg·kg-1劑量灌胃給予Rg1，經(jīng)適當(dāng)處理后采用UHPLC-MS/MS方法進行測定。
　　 結(jié)果:UHPLC-MS/MS測定方法的