木豆根中染料木素和芹菜素提取純化工藝及其抗氧化活性研究.pdf

1、本文首次研究了木豆根中染料木素和芹菜素的負(fù)壓空化提取工藝,并利用大孔吸附樹脂、柱色譜和重結(jié)晶等多種方法對(duì)木豆根中染料木素和芹菜素的純化工藝條件進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。同時(shí),對(duì)木豆根的乙醇提取物以及染料木素和芹菜素進(jìn)行了抗氧化活性研究。結(jié)果如下:
　　 1、確定了RP-HPLC同時(shí)分析檢測(cè)木豆根中染料木素和芹菜素的色譜條件:
　　 色譜柱:Diamonsil C18V(5μm,250 mm×4.6 mm I.D.),流速:1 m

2、L/min,柱溫:30℃,檢測(cè)波長(zhǎng):260 nm,進(jìn)樣量:10μL。流動(dòng)相體系為甲醇-水-甲酸(65:34.935:0.065,v/v/v)。
　　 2、對(duì)負(fù)壓空化提取木豆根中染料木素和芹菜素的條件進(jìn)行了優(yōu)化,對(duì)影響提取率的各因素進(jìn)行了考察,確定了最優(yōu)負(fù)壓空化提取工藝參數(shù):
　　 提取溶劑:體積分?jǐn)?shù)70％乙醇溶液
　　 原料粒徑:50目
　　 液固比:44:1
　　 提取時(shí)間:45 min

3、　　 負(fù)壓壓力:-0.05 MPa
　　 提取次數(shù):3次
　　 提取溫度:室溫
　　 在上述優(yōu)化的條件下對(duì)木豆根進(jìn)行提取,染料木素和芹菜素的平均提取率分別為:0.418 mg/g和0.118 mg/g,其RSD分別為:1.06％和1.53％,在浸膏中含量分別為:1.62％和0.22％。
　　 3、首次確立了木豆根中染料木素和芹菜素的最佳純化工藝:
　　 (1)大孔吸附樹脂富集過程中,較優(yōu)的大孔吸

4、附樹脂為ADS-5型,確定了ADS-5大孔吸附樹脂分離純化染料木素和芹菜素的最佳條件:
　　 上樣濃度:染料木素0.3307 mg/mL,芹菜素0.0475 mg/mL
　　 上樣體積:20BV
　　 上樣流速:1 mL/min
　　 上樣溶液pH值:4.5
　　 解吸溶液及體積:體積分?jǐn)?shù)20％乙醇溶液4 BV及體積分?jǐn)?shù)70％乙醇溶液10 BV
　　 解吸流速:1 mL/min
　　

5、 操作溫度:25℃
　　 在上述優(yōu)化的條件下,經(jīng)過ADS-5大孔吸附樹脂處理,染料木素的含量從1.62％增加到15.16％,提高了9.36倍,芹菜素的含量從0.22％增加到2.44％,提高了11.09倍,回收率分別為89.78％和93.41％。
　　 (2)確定了正相中壓硅膠柱層析條件:300-400目硅膠;上樣量與硅膠用量比為:1:50;徑高比:1:3.5;洗脫劑為:乙酸乙酯-石油醚(12:1,v/v);梯度洗脫流速

6、為:30mL/min。在柱層析過程中,利用TLC跟蹤檢測(cè)。收集硅膠柱層析富含染料木素和芹菜素的餾分,得純度分別為73.26％和20.13％的染料木素和芹菜素粗品,收率為:65.37％和70.25％。
　　 (3)確定了反相中壓硅膠柱層析條件:ODS-反相填料:上樣量與填料用量比為:1:120:徑高比:1:10;洗脫劑:甲醇—水—甲酸(60:39.935:0.065,v/v/v)。
　　 (4)結(jié)晶溶劑為甲醇,微熱溶解,室

7、溫靜置、析晶,得染料木素和芹菜素分別為黃色和淡黃色針狀晶體,純度為:85-90％。用三氯甲烷:石油醚(1:3,v/v)體系進(jìn)行多次重結(jié)晶,得純度大于95％的染料木素和芹菜素晶體,回收率為63.27％和68.53％。
　　 染料木素和芹菜素純化的全過程總收率為:37.13％和44.97％。
　　 (5)通過理化性質(zhì)反應(yīng)結(jié)合FT-IR、ESI-MS-MS與1H-NMR和13C-NMR,確定所得產(chǎn)品為目標(biāo)化合物。
　　

8、 4、研究了木豆根的乙醇提取物和木豆根中染料木素和芹菜素單體的抗氧化活性:
　　 在DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)中,木豆根提取物在低濃度時(shí),對(duì)DPPH自由基的清除能力較差,在較高濃度(＞2 mg/mL)時(shí),DPPH自由基清除率較高,其IC50為1.184mg/mL,木豆莖提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力較好,其IC50為0.844 mg/mL。但是根中的染料木素和芹菜素在DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)中均表現(xiàn)出較好的抗氧化活性,其IC50分別