Genistein介導(dǎo)的氧化應(yīng)激對(duì)卵巢癌細(xì)胞順鉑敏感性的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤，發(fā)病率僅次于宮頸癌，而病死率卻高居榜首。以順鉑為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療在卵巢癌綜合治療中占有重要的位置，但由于腫瘤細(xì)胞耐藥性的產(chǎn)生，限制了它的臨床應(yīng)用，成為卵巢癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及死亡率高居不下的主要原因。因此，尋求有效的耐藥逆轉(zhuǎn)劑或有效的化療增敏劑是提高卵巢癌化療療效的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
　　Genistein主要是從豆類植物中提取的異黃酮類多酚化合物。因其結(jié)構(gòu)與雌二醇相似，故也稱之為植物雌激素。Genistein具有廣泛的

2、生物學(xué)活性，包括抗腫瘤，抗氧化，抗炎，改善心血管功能等，尤其在抗腫瘤方面，具有很大的潛能。近來研究表明，Genistein可以通過促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞的凋亡來增加耐藥腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，但其具體機(jī)制仍不清楚。
　　Genistein一直被認(rèn)為是天然的抗氧化劑，是ROS的清除劑，很多研究也都集中在其抗氧化，清除氧自由基方面。但事實(shí)上Genistein不但具有抗氧化的作用，同時(shí)也具有促氧化的作用，而在抗腫瘤誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡方面，其

3、促氧化作用更為重要。Genistein可能作為一個(gè)促氧化的代表，通過其介導(dǎo)的氧化應(yīng)激刺激細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生，而ROS與腫瘤細(xì)胞的凋亡密切相關(guān)，它可以通過介導(dǎo)DNA的片段化而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的發(fā)生。ROS在多種抗腫瘤藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡過程中起著介導(dǎo)和調(diào)節(jié)作用，順鉑發(fā)揮抗腫瘤的作用也依賴于ROS的產(chǎn)生。與正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞清除ROS的能力較低，對(duì)ROS比較敏感。由此推斷，通過刺激腫瘤細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生，改變腫瘤細(xì)胞的氧化還原平衡狀態(tài)，

4、對(duì)DNA造成氧化損傷，從而啟動(dòng)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，這可能是Genistein抗腫瘤的機(jī)理之一?；谝陨戏治觯菊n題初步研究了Genistein介導(dǎo)的氧化應(yīng)激對(duì)卵巢癌細(xì)胞順鉑敏感性的影響及其可能作用機(jī)制。
　　研究目的
　　1.比較卵巢癌順鉑敏感株A2780及耐藥株CP70細(xì)胞內(nèi)ROS水平的差異，尋找兩種細(xì)胞耐藥差異與ROS的相關(guān)性。
　　2.探討ROS在Genistein誘導(dǎo)的CP70細(xì)胞凋亡過程中的作用。
　　3.

5、探討Genistein介導(dǎo)的氧化應(yīng)激對(duì)順鉑敏感性的影響及其可能作用機(jī)制。
　　研究方法
　　1.通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)卵巢癌順鉑敏感株A2780和耐藥株CP70細(xì)胞內(nèi)的ROS水平。
　　2.采用MTT比色法檢測(cè)不同濃度的Genistein對(duì)CP70細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　3.通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同藥物處理后CP70細(xì)胞內(nèi)ROS水平，線粒體膜電位的變化及細(xì)胞凋亡的情況。
　　4.利用免疫細(xì)胞化學(xué)法和Wester

6、nblot法檢測(cè)不同藥物處理后CP70細(xì)胞中Bcl-2，Caspase-3蛋白的表達(dá)水平。
　　5.ROS清除劑NAC干預(yù)后分別利用以上方法檢測(cè)CP70細(xì)胞內(nèi)ROS水平，細(xì)胞凋亡率，線粒體膜電位的變化及Bcl-2和Caspase-3蛋白的表達(dá)水平。
　　研究結(jié)果
　　1.順鉑敏感株A2780細(xì)胞內(nèi)的ROS水平明顯高于耐藥株CP70細(xì)胞。
　　2.Genistein能以時(shí)間和劑量依賴的方式抑制CP70細(xì)胞的增殖，并

7、能誘導(dǎo)其凋亡。
　　3.Genistein處理CP70細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯增加，同時(shí)細(xì)胞凋亡率也隨之增加，而線粒體膜電位反而降低。
　　4.Genistein和順鉑合用組與順鉑單用組相比，CP70細(xì)胞內(nèi)的ROS水平和細(xì)胞凋亡率均升高，線粒體膜電位降低。
　　5.Bcl-2和Caspase-3在CP70細(xì)胞內(nèi)呈漿核共表達(dá)。Genistein和順鉑合用與順鉑單用相比，CP70細(xì)胞內(nèi)Bcl-2的表達(dá)降低，Caspas

8、e-3的表達(dá)增高。
　　6.ROS清除劑NAC的干預(yù)抑制了ROS水平的增加，抑制了線粒體膜電位的降低，同時(shí)也使CP70細(xì)胞的凋亡率降低，Bcl-2蛋白的表達(dá)升高，而Caspase-3蛋白的表達(dá)降低。
　　結(jié)論
　　1.順鉑敏感株A2780和耐藥株CP70細(xì)胞內(nèi)的ROS水平存在差異，這可能是這兩種細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性不同的原因之一。
　　2.Genistein能以時(shí)間和劑量依賴的方式抑制CP70細(xì)胞的增殖，并能誘導(dǎo)其凋