荷CEA-rV的DC誘導(dǎo)的CIK對(duì)CEA陽(yáng)性原代腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷作用.pdf

1、背景：腫瘤(tumor,neoplasm)是一類嚴(yán)重危害人類身體健康的常見病和多發(fā)病，全世界每年約有500萬(wàn)人死于惡性腫瘤，我國(guó)惡性腫瘤發(fā)病率每年約在100/10萬(wàn)人口以上，每年約90萬(wàn)人死于惡性腫瘤。人們不斷的拓展對(duì)于惡性腫瘤的治療寬度與深度，生物治療是在傳統(tǒng)的腫瘤治療模式上發(fā)展起來(lái)的第四種治療模式，生物療法與其他療法的不同之處，就是在于它可以幫助機(jī)體恢復(fù)同腫瘤細(xì)胞作斗爭(zhēng)的能力，最大限度地調(diào)動(dòng)人體的免疫功能，同時(shí)生物治療產(chǎn)生的大量特

2、 異而有效的免疫效應(yīng)細(xì)胞可以對(duì)體內(nèi)殘存腫瘤細(xì)胞具有更直接更有效的殺滅作用。樹突狀細(xì)胞(Dendriticcell，DC)是一種功能強(qiáng)大的抗原遞呈細(xì)胞，能夠吞噬、處理腫瘤抗原并把抗原信號(hào)傳遞給淋巴細(xì)胞，并且這種處理抗原的能力在體外要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于體內(nèi)的其他提呈細(xì)胞，從而引起抗原特異性免疫反應(yīng)，并在細(xì)胞免役調(diào)節(jié)反應(yīng)中起重要作用。癌胚抗原(CarcinoembryonicAntigen，CEA)是首先在結(jié)腸癌病人的血清中發(fā)現(xiàn)的一種球蛋白，在原

3、發(fā)性結(jié)腸癌患者CEA增高占45-80％；食道癌、腺癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系統(tǒng)的腫瘤陽(yáng)性率也很高，一般在50-70％。CIK細(xì)胞(cytokineinducedkiller，CIK)溶瘤作用是非MHC限制性的，即不受癌癥組織類型的限制，因此對(duì)任何一種癌癥均有殺滅作用。我們選擇CEA陽(yáng)性的惡性腫瘤進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)，采用CEA重組基因痘苗(CEArecombinantvirus，CEA-rV)負(fù)荷臍血來(lái)源DC后，再誘導(dǎo)抗原特異的CIK細(xì)胞，研

4、究其對(duì)CEA陽(yáng)性惡性腫瘤原代細(xì)胞殺傷活性作用。 目的：用CEA-rV負(fù)荷臍血來(lái)源DC后，再誘導(dǎo)CEA抗原特異的CIK，研究負(fù)載了CEA-rV的DC和CIK共培養(yǎng)后對(duì)CEA陽(yáng)性原代腫瘤細(xì)胞的殺傷活性的作用。 方法：選取臨床上血清學(xué)檢測(cè)CEA表達(dá)增高的腫瘤患者的手術(shù)標(biāo)本，進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)。對(duì)CEA-rV進(jìn)行擴(kuò)增和滴度測(cè)定。用淋巴細(xì)胞分離液分離臍帶血單核細(xì)胞(cordbloodmononuclearcell，CBMC)，分別誘

5、導(dǎo)DC、CEA-rV負(fù)載DC和CIK細(xì)胞，并與CIK混合培養(yǎng)誘導(dǎo)CEA特異的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CEA-rV-DC-CIK組)、并且設(shè)計(jì)無(wú)CEA-rV負(fù)載的DC和CIK細(xì)胞混合組(DC-CIK組)、單純CIK組、CEA-rV-DC-單個(gè)核細(xì)胞組和單個(gè)核細(xì)胞組。用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察DC的形態(tài)和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)和原代腫瘤細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC和CIK的分子表型；MTT法測(cè)殺傷活性。 結(jié)果：在負(fù)荷CEA抗原多肽的DC的共同培養(yǎng)

6、下，所誘導(dǎo)的CEA抗原特異性的CIK對(duì)CEA陽(yáng)性原代腫瘤細(xì)胞具有抗原特異的殺傷活性。①CIK細(xì)胞較CBMC對(duì)原代腫瘤細(xì)胞的殺傷活性明顯提高(52.3％和48.5，P＜0.05)。②CEA-rV-DC-CIK對(duì)CEA陽(yáng)性原代腫瘤細(xì)胞的殺傷活性明顯高于DC-CIK細(xì)胞(P＜0.001)。③CEA-rV-DC-CIK和CEA-rV-DC-CBMC比較，發(fā)現(xiàn)在相同抗原刺激下CIK細(xì)胞的殺傷活性明顯高于CBMC(P＜0.001)。④DC-CIK組