IGF-Ⅰ、TNF-α對(duì)去子宮大鼠卵巢顆粒細(xì)胞及E-,2-、P分泌影響的研究.pdf

1、目的:本研究旨在探討細(xì)胞因子IGF-Ⅰ、TNF-α對(duì)去子宮大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖、凋亡及E2、P分泌的影響。 方法1.動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)選用35只成年雌性Sprague-Dawley大鼠。選取30只并分6組(模型組、IGF-Ⅰ1組、IGF-Ⅰ2組、IGF-Ⅰ3組、IGF-Ⅰ4組和TNF-α組，每組5只)，手術(shù)切除子宮，保留雙側(cè)卵巢。其余5只作為正常對(duì)照組行假手術(shù)。全部大鼠均在相同條件下喂養(yǎng)3個(gè)月。 2.卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)：3個(gè)月后，

2、經(jīng)陰道涂片確定動(dòng)情周期。當(dāng)大鼠處于發(fā)情前期時(shí)將其處死。取發(fā)育中卵泡的顆粒細(xì)胞進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)。使用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基，將Gcs濃度調(diào)至實(shí)驗(yàn)所需，接種于多孔培養(yǎng)板，置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中孵育。24h后，在所分的各組顆粒細(xì)胞中，分別加入IGF-Ⅰ(1.2，12，60，120ng/ml)、TNF-α(60ng/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)5天。 3.關(guān)于細(xì)胞增殖：3.1應(yīng)用四唑鹽比色法(MTT法)觀察細(xì)胞增殖；3.2應(yīng)用彩色圖像

3、分析系統(tǒng)比較各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征。 4.關(guān)于細(xì)胞凋亡：4.1流式細(xì)胞儀測(cè)定各組細(xì)胞凋亡率(碘化丙啶染色)；4.2熒光顯微鏡觀察各組細(xì)胞凋亡情況(吖啶橙染色)；4.3彩色圖像分析系統(tǒng)比較各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征(HE染色)。 5.關(guān)于卵巢E2、P：每日換液時(shí)收集上清液，冷凍干燥后，-40℃低溫冰箱保存。放射免疫方法測(cè)定E2、P。 結(jié)果1.卵巢顆粒細(xì)胞增殖形態(tài)學(xué)及增殖率的變化：模型組較正常組增殖降低；IGF-Ⅰ組較模型組增殖

4、降低減緩，存在劑量-效應(yīng)關(guān)系(1.2～120ng/ml)；而TNF-α組(60ng/ml)較模型組增殖降低加劇。 2.卵巢顆粒細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)及凋亡率的變化：模型組較正常組凋亡升高；IGF-Ⅰ組較模型組凋亡升高減緩；而TNF-α組較模型組凋亡升高加劇。 3.卵巢E2、P的變化：模型組較正常組E2、P降低；IGF-Ⅰ組較模型組E2、P降低減緩，存在劑量-效應(yīng)關(guān)系(1.2～120ng/ml)；而TNF-α組較模型組E2、P降低