五甲基槲皮素抗糖尿病大鼠腎臟纖維化的作用及機(jī)制研究.pdf

1、五甲基槲皮素是多甲氧基黃酮類化合物中的一員,主要存在于沙棘果實(shí)及山奈屬植物的根莖中。本實(shí)驗(yàn)室以槲皮素為原料,采取全甲基化的方法,成功合成了五甲基槲皮素,解決了其天然來源較為困難的問題,為研究其藥理學(xué)作用提供了保障。我們的前期實(shí)驗(yàn)已證明,五甲基槲皮素的藥效學(xué)作用有:改善乳鼠腹腔注射鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病模型的高血糖癥狀,上調(diào)3T3-L1前脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素水平,阻止心肌肥大以及改善代謝綜合征等。同時(shí),我們發(fā)現(xiàn),五甲基槲皮素不僅可以改善糖尿病大

2、鼠的高血糖癥狀,還能夠有效地減少尿量。由此,我們?cè)噲D探究其對(duì)糖尿病條件下腎臟的作用,尤其關(guān)注糖尿病腎病中最為典型的腎臟纖維化的病理變化。因此,本課題根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,選擇了癥狀與糖尿病人相似的,自發(fā)型II型糖尿病GK大鼠為動(dòng)物模型,探討五甲基槲皮素對(duì)該模型腎臟纖維化的作用。同時(shí),采用高糖誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞,模擬糖尿病時(shí)的體內(nèi)環(huán)境,在細(xì)胞水平進(jìn)一步研究五甲基槲皮素抗腎臟纖維化的作用及可能的機(jī)制。
　　目的:研究PMQ對(duì)自發(fā)型II型糖尿病

3、GK大鼠腎臟纖維化及高糖培養(yǎng)的系膜細(xì)胞纖維化指標(biāo)的作用,并探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法:(1)在整體動(dòng)物中,12周齡的雄性GK大鼠隨機(jī)分為5組:GK大鼠模型組,PMQ5、10、20mg/kg組,陽性藥二甲雙胍300mg/kg組,同齡的雄性Wistar大鼠作為對(duì)照組,每組7-9只。每周對(duì)各組大鼠體重、飲水及進(jìn)食情況進(jìn)行監(jiān)測。給藥后15周檢測各組大鼠空腹及餐后血糖、胰島素水平,以及空腹甘油三酯和總膽固醇水平。給藥16周后,進(jìn)行口服

4、糖耐量實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前,監(jiān)測各組大鼠24h尿量、尿糖、尿白蛋白、肌酐及尿素氮水平,并計(jì)算尿白蛋白排泄率。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),摘取兩側(cè)腎臟稱重,并結(jié)合體重計(jì)算腎臟指數(shù);通過對(duì)腎臟的PAS及Masson染色進(jìn)行病理學(xué)檢測。同時(shí),在mRNA及蛋白水平上,檢測纖維化相關(guān)因子纖粘蛋白及IV型膠原的表達(dá)情況。(2)在細(xì)胞水平上,采用高糖培養(yǎng)系膜細(xì)胞,并加入PMQ1、3或10μM或卡托普利100μM干預(yù)48h后,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。分別采用CM-DiI染色檢測細(xì)胞

5、大小,MTT法檢測細(xì)胞增殖及天狼星紅染色法檢測膠原總量;同時(shí),在mRNA及蛋白水平上,檢測纖維化相關(guān)因子纖粘蛋白及IV型膠原的表達(dá)情況。(3)檢測在各組大鼠腎臟組織及高糖誘導(dǎo)各組的系膜細(xì)胞中TGF-β1、Smad7、Smad2/3及p-Smad2/3mRNA與蛋白水平表達(dá)情況。
　　結(jié)果:(1)在整體動(dòng)物上,與GK大鼠相比,PMQ給藥組在以下幾方面具有改善作用:a.改善糖脂代謝,胰島素抵抗及糖耐量受損情況。b.改善多尿癥狀,降低尿

6、糖水平及腎臟指數(shù)。c.減輕腎小球肥大及糖原沉積。d.在mRNA及蛋白水平,降低纖粘蛋白及IV型膠原的表達(dá)。(2)在細(xì)胞水平上,與高糖組相比,PMQ給藥組可抑制高糖導(dǎo)致的系膜細(xì)胞過度增殖,細(xì)胞肥大以及總膠原的積累,在mRNA及蛋白水平,降低纖粘蛋白及IV型膠原的表達(dá)。(3)在大鼠腎臟組織及系膜細(xì)胞中,與模型組相比,在mRNA及蛋白水平上,給予PMQ后,可降低其TGF-β1及Smad2/3磷酸化的水平,升高Smad7的表達(dá)。
　　結(jié)論