炎癥對(duì)人腎系膜細(xì)胞增殖的影響及曲格列酮的干預(yù)機(jī)制探討.pdf

1、目的：觀察曲格列酮對(duì)腫瘤壞死因子α(TNF-α)誘導(dǎo)的人腎小球系膜細(xì)胞(HMCL)增殖及細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)mRNA和蛋白表達(dá)的影響，探討曲格列酮在炎癥誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞中的作用及其可能機(jī)制，為臨床治療提供藥理學(xué)靶點(diǎn)和理論依據(jù)。 方法：將培養(yǎng)的HMCL分為空白對(duì)照組，不同濃度HNF-α誘導(dǎo)組，不同濃度曲格列酮干預(yù)組，曲格列酮對(duì)照組。采用噻唑藍(lán)比色法(MTT)檢測(cè)各組系膜細(xì)胞增殖水平，逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)

2、法檢測(cè)各組系膜細(xì)胞ICAM-1mRNA的表達(dá)水平，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)各組系膜細(xì)胞培養(yǎng)上清中ICAM-1蛋白表達(dá)水平，免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)法檢測(cè)各組系膜細(xì)胞NF-κB蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果： (1)MTT法結(jié)果分析：不同濃度TNF-α組系膜細(xì)胞增殖水平明顯高于空白對(duì)照組(P＜0.05)，在TNF-α誘導(dǎo)的48h內(nèi)，于24h呈現(xiàn)增殖高峰，與6h組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，各濃度曲格列酮干預(yù)組系膜細(xì)胞

3、增殖水平明顯低于TNF-α誘導(dǎo)組(P＜0.05)。 (2)RT-PCR結(jié)果分析：不同濃度TNF-α誘導(dǎo)組ICAM-1mRNA表達(dá)明顯增高，與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，各濃度曲格列酮干預(yù)組系膜細(xì)胞ICAM-1mRNA表達(dá)明顯低于TNF-α誘導(dǎo)組(P＜0.05)。 (3)ELISA結(jié)果分析：不同濃度TNF-α誘導(dǎo)組ICAM-1蛋白表達(dá)明顯增高，與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，各濃度曲格列酮干預(yù)

4、組系膜細(xì)胞ICAM-1蛋白表達(dá)明顯低于TNF-α誘導(dǎo)組(P＜0.05)。 (4)ICC結(jié)果分析：不同濃度TNF-α誘導(dǎo)組NF-κB蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯增高，與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，各濃度曲格列酮干預(yù)組系膜細(xì)胞NF-κB蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于TNF-α誘導(dǎo)組(P＜0.05)。 結(jié)論： (1)TNF-α可增強(qiáng)系膜細(xì)胞增殖，上調(diào)細(xì)胞表面ICAM-1mRNA和蛋白的表達(dá)，并使NF-κB蛋白的表達(dá)增高，