吡格列酮對大鼠腎小球系膜細胞P38MAPK介導的氧化應激的影響.pdf

1、目的：觀察鹽酸吡格列酮（Pioglitazone,PIO)對高糖培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細胞（Mesangial Cells,MCs)P38絲裂原活化蛋白激酶（P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)及其介導的氧化應激的影響,探討其腎保護機制,為糖尿病腎臟病變的防治提供新思路。
　　方法：體外培養(yǎng)大鼠腎小球 MCs,隨機分為正常對照（NG)組、高糖（HG)組、P38MAPK抑制劑SB2

2、03580干預（S)組、吡格列酮低濃度（P1)組、吡格列酮高濃度(P2)組。48h后分別收集細胞及上清液。采用流式細胞術檢測細胞內活性氧（Reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot測定磷酸化 P38MAPK（phosphory1ated P38MAPK,p-p38)、P38MAPK、p22phox、p47phox蛋白含量;逆轉錄聚合酶鏈反應（Reverse transcription poly

3、merase chain reaction,RT-RCR)檢測細胞還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate,NADPH)氧化酶亞基p22phox、p47phox mRNA表達;采用比色法檢測MCs上清液中的超氧化物歧化酶（superoxide Dismutase,SOD)、過氧化氫酶（catalase,CAT)活性和丙二醛（malondialdehyde,MD

4、A)水平。
　　結果：
　　1、各組大鼠腎小球MCs ROS水平的比較
　　與NG組相比,高糖刺激48 h后,HG組細胞內ROS生成量增多（P<0.05)。SB203580和PIO預先干預后,細胞內ROS生成量顯著降低（P<0.05)。
　　2、各組大鼠腎小球MCs P38MAPK磷酸化程度的比較
　　HG組p-p38水平較NG組顯著增高（P<0.01)。與HG組比較,S組、P1組和P2組P38MAPK磷酸

5、化水平明顯降低（P<0.05)。但各組間總P38MAPK表達無明顯變化。
　　3、各組大鼠腎小球MCs p22phox、p47phox蛋白表達量的比較
　　Western blot結果顯示,NG組MCs可低水平表達p22phox、p47phox,高糖刺激48 h,p22phox、p47phox蛋白表達量顯著增加（P<0.01)。而SB203580和PIO均可減少高糖介導的p22phox、p47phox高表達（P<0.05)。

6、
　　4、各組大鼠腎小球MCs p22phox、p47phox mRNA的比較
　　與 NG組相比,高糖培養(yǎng)48 h后 MCs p22phox、p47phox mRNA表達上調（P<0.05)。SB203580和PIO均可顯著抑制高糖介導的p22phox、p47phox mRNA高表達（P<0.05)。
　　5、各組大鼠腎小球MCs上清液中SOD、CAT活性和MDA水平的比較
　　HG刺激后,SOD和CAT活性明

7、顯下降,MDA含量明顯升高（P<0.01),經(jīng)SB203580和不同濃度PIO干預,SOD和CAT活性不同程度升高,MDA含量減少（P<0.05)。
　　6、相關性分析
　　Pearson相關分析結果顯示,大鼠腎小球MCs內 p-p38水平與ROS水平、MDA含量正相關（P<0.01),與SOD、CAT活力呈負相關（P<0.05)。此外,ROS水平與p22phox、p47phox蛋白表達水平正相關（P<0.01)。