滋腎通絡(luò)方對高糖誘導的大鼠腎小球系膜細胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9影響的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 糖尿病腎病(diabeticnephropathy，DN)近年來已經(jīng)成為影響國民健康的重大問題。腎小球系膜細胞(glomerularmesangialcells，GMCs)是最早成為DN的發(fā)病機制和藥物作用靶點的研究對象的。GMCs的活躍性使得其在受到持續(xù)的高糖或代謝紊亂等的刺激是會發(fā)生自身的增殖，并引起分泌過量的細胞外基質(zhì)(ExtracellularMatrix，ECM)。ECM過度積聚系膜區(qū)則會促使基底膜增厚，

2、日久則會導致的腎小球硬化以及間質(zhì)纖維化，此基本病理改變會貫穿于DN病程的始終。與此同時，GMCs還可以分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase，MMPs)，正常狀態(tài)下，該酶可以維持ECM生成與降解的動態(tài)平衡，DN發(fā)生時，該酶類降解能力的失衡引發(fā)ECM過度聚積。ECM的主要成分為Ⅳ型膠原，基質(zhì)金屬降解酶-2(matrixmetalloproteinase-2，MMP-2)、基質(zhì)金屬降解酶-9(matrixmeta

3、lloproteinase-9，MMP-9)是降解該膠原的主要的基質(zhì)金屬蛋白酶類。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1)作為致腎小球纖維化的重要的細胞因子，可以通過直接導致腎臟ECM分泌過多，也可通過抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的活性間接導致ECM的過度積聚，加速DN的進程。
　　 中醫(yī)藥在防治DN方面經(jīng)常通過多靶點、多環(huán)節(jié)共同作用改善患者的臨床癥狀，延緩糖尿病腎病的進程，具有其獨特的優(yōu)

4、勢。因此對于中醫(yī)藥防治DN的機制研究就顯得尤其重要。本論文在馬建偉教授前期研究的滋腎通絡(luò)方可以有效防治DN的基礎(chǔ)上，應(yīng)用體外細胞實驗，從細胞外基質(zhì)降解的角度，以苯那普利作為陽性藥物，以高糖環(huán)境下LPS刺激的大鼠腎小球系膜細胞作為模型，觀察滋腎通絡(luò)方含藥血清對于大鼠腎小球系膜細胞增殖以及TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA表達的影響，探討滋腎通絡(luò)方治療DN的機制，為進一步研究其防治DN的作用機理提供理論依據(jù)。
　　 方法:

5、
　　 1、應(yīng)用血清藥理學方法，制備滋腎通絡(luò)方不同劑量含藥血清;
　　 2、采用高糖+LPS作為刺激因子，培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細胞，促使其增殖;
　　 3、將大鼠腎小球系膜細胞分為8組:
　　 (1)正常組;(2)高糖組;(3)高糖加LPS組;(4)苯那普利組;(5)滋腎通絡(luò)方小劑量組;(6)滋腎通絡(luò)方中劑量組;(7)滋腎通絡(luò)方大劑量組;(8)芪地合劑組;
　　 4、MTT法:檢測滋腎通絡(luò)方含藥血清

6、對于大鼠腎小球系膜細胞增殖情況的影響。
　　 5、RT-PCR:檢測各組大鼠腎小球系膜細胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA的表達。
　　 結(jié)果:
　　 1、與正常組相比，高糖+LPS能明顯刺激體外培養(yǎng)的GMCs增殖，而與模型組相比，滋腎通絡(luò)方含藥血清能明顯抑制GMCs增殖(P＜0.05)。
　　 2、大鼠腎小球系膜細胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA水平的表達:與模型組相比較，滋腎

7、通絡(luò)方大、中、小劑量組對大鼠腎小球系膜細胞TGF-β1mRNA表達顯著降低(P＜0.05)，MMP-2、MMP-9mRNA表達明顯升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、滋腎通絡(luò)方含藥血清能明顯抑制高糖+LPS條件下GMCs增殖;
　　 2、滋腎通絡(luò)方含藥血清能夠抑制大鼠腎小球系膜細胞TGF-β1mRNA的表達，增加MMP-2、MMP-9mRNA的表達，從而通過增加腎小球系膜細胞細胞外基質(zhì)的降解以延緩DN