吸煙和植物多酚在大鼠腹主動脈瘤形成過程中的交互作用研究.pdf

1、影響腹主動脈瘤(Abdominal aortic aneurysm，AAA)發(fā)生和發(fā)展的因素十分復(fù)雜。涉及遺傳和環(huán)境因素的多個方面，但具體病因和病理未明。動脈壁基質(zhì)的破壞，即膠原纖維和彈力纖維的降解是其重要原因。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，吸煙在AAA的發(fā)生、發(fā)展、破裂等一系列過程中起到重要作用，但是吸煙影響AAA的生物學(xué)通路尚未明確。五沒食子酰葡萄糖(1，2，3，4，6-Penta-O-galloyl-β-D-glucopyranose，pen

2、tagal loyl glucose，PGG)是一種植物單寧，具有與蛋白質(zhì)結(jié)合的作用，可防止彈力蛋白被降解，從而保護(hù)主動脈壁。本研究采用析因?qū)嶒?yàn)設(shè)計，將PGG和吸煙作為兩個處理因素，觀察二者對于AAA擴(kuò)張的單獨(dú)效應(yīng)和交互作用。由于PGG對于保護(hù)動脈壁彈性纖維的生物學(xué)通路已知，從而根據(jù)二者產(chǎn)生的交互作用，可間接探索吸煙致AAA是否與PGG的生物學(xué)通路相同，為生物學(xué)通路研究提供實(shí)驗(yàn)參考。
　　目的：
　　對吸煙與植物多酚在大鼠A

3、AA形成過程中的單獨(dú)作用和交互作用進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)研究。通過大鼠動脈直徑、動脈開環(huán)角及動脈壁病理改變，驗(yàn)證PGG對于AAA的保護(hù)作用，探討吸煙是否能夠?qū)е赂怪鲃用}擴(kuò)張和動脈壁組織破壞，并且通過對吸煙和PGG的交互作用分析，探討吸煙是否通過增加基質(zhì)金屬蛋白酶使動脈壁組織水解，從而對AAA的發(fā)展產(chǎn)生影響。
　　方法：
　　采用SD大鼠，經(jīng)GaGl2外膜孵育建立AAA模型，采用2×2交叉設(shè)計將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分組，處理因素為吸煙和PGG浸

4、潤：吸煙處理方式為術(shù)后持續(xù)吸煙4周，PGG處理方式為開腹手術(shù)時給予PGG動脈外膜浸潤。將造瘤大鼠分為吸煙組、吸煙加PGG組、PGG組、單造瘤對照組共四組。所有大鼠按實(shí)驗(yàn)計劃干預(yù)4周后開腹，活體測量實(shí)驗(yàn)鼠腹主動脈直徑及開環(huán)角；取腹主動脈標(biāo)本并處死實(shí)驗(yàn)動物，將標(biāo)本分別進(jìn)行HE染色觀察組織形態(tài)，彈力纖維染色觀察彈力纖維的完整性，免疫組化染色觀察MMP-2及MMP-9(matrix metal loproteinases，MMPs)在動脈壁各層

5、間的分布及定性觀察組間差異。
　　結(jié)果：
　　為60只SD大鼠實(shí)施AAA建模手術(shù)，49只大鼠成功建立AAA模型并存活。按實(shí)驗(yàn)計劃分四組實(shí)施干預(yù)后，共獲得大鼠腹主動脈標(biāo)本49份?；铙w測量腹主動脈直徑和開環(huán)角并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析的結(jié)果為：(1)吸煙組腹主動脈直徑及開環(huán)角最大，但組間無統(tǒng)計學(xué)差異；(2)單純PGG浸潤組腹主動脈直徑和開環(huán)角最小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；(3)吸煙與PGG的交互作用對大鼠腹主動脈直徑和開環(huán)角的影響無統(tǒng)計學(xué)意義。

6、取腹主動脈標(biāo)本進(jìn)行三種染色的結(jié)果為：(1)HE染色示4組動物腹主動脈外膜增厚，中膜增寬，局部中膜斷裂，外膜及中膜中大量炎癥細(xì)胞浸潤；(2)彈力纖維染色顯示施加了PGG的單純PGG浸潤組和吸煙加PGG浸潤組，其彈力纖維形態(tài)較為完整，彈力纖維延續(xù)性好，斷裂少。吸煙組的彈力纖維的斷裂情況則相當(dāng)嚴(yán)重；(3)MMP-2及MMP-9免疫組化染色可見MMP-2的分布以中膜和外膜為主，尤以吸煙組為重；MMP-9的分布則主要在外膜和中膜靠近內(nèi)膜的一側(cè)為主

7、，大部分中膜組織MMP-9含量較少。
　　結(jié)論：
　　PGG外膜孵育對大鼠CaCl2誘導(dǎo)AAA模型具有顯著的保護(hù)作用，可使造瘤大鼠腹主動脈直徑和開環(huán)角減小，并且彈力纖維染色發(fā)現(xiàn)動脈壁彈力纖維延續(xù)性好。短期吸煙、短期吸煙與PGG的交互作用對大鼠腹主動脈直徑和開環(huán)角的影響，能夠觀察到組間差異但經(jīng)檢驗(yàn)無統(tǒng)計學(xué)意義。彈力染色發(fā)現(xiàn)吸煙使彈力纖維斷裂情況極為嚴(yán)重，免疫組化染色示MMP-2在動脈壁中膜和外膜大量累積，提示吸煙對實(shí)驗(yàn)性鼠腹主