Calcitriol通過VDR抑制晚期糖基化蛋白產(chǎn)物誘導(dǎo)的人腎系膜細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和RAGE-ROS-NF-κB信號通路的活化.pdf

1、維生素D是通過與骨，甲狀旁腺，腎臟和胃腸道的相互作用調(diào)節(jié)鈣穩(wěn)態(tài)，已經(jīng)被用來作為糖尿病腎病(DKD)的常規(guī)用藥。幾個臨床試驗表明，維生素D在糖尿病腎病的治療中，存在著減少蛋白尿和減緩腎損傷的抗炎作用，但其作用機制尚不清楚。而晚期糖化終產(chǎn)物(AGEs)在血漿和腎的積累，在糖尿病腎病中，是大家公認(rèn)的促炎癥分子。為了探索這種抗炎作用，我們設(shè)計實驗。
　　研究目的:探尋骨化三醇減少AGEs引起的人腎系膜細(xì)胞炎癥反應(yīng)的機制，具體是探尋骨化三醇

2、對AGEs引起的人系膜細(xì)胞表達(dá)白細(xì)胞介素-6(IL-6)和單核細(xì)胞趨化因子(MCP-1)和對AGE-RAGE-ROS-NF-κB信號通路的影響。
　　研究方法:通過體外制備AGE-HSA和培養(yǎng)人腎臟系膜細(xì)胞，在明確AGE-HSA時間依賴和濃度依賴下引起腎臟系膜細(xì)胞炎癥反應(yīng)后，使用或不使用骨化三醇進(jìn)行干預(yù)，使用ELISA檢測IL-6和MCP-1細(xì)胞上清中蛋白的表達(dá)，免疫蛋白印跡檢測VDR、RAGE、核轉(zhuǎn)位因子-κB的蛋白表達(dá);實時定

3、量-PCR檢測IL-6、MCP-1、VDR、RAGE的mRNA的表達(dá);流式細(xì)胞技術(shù)檢測活性氧(ROS)的表達(dá)，免疫熒光法檢測活性氧的表達(dá)和核轉(zhuǎn)位因子-κB的核轉(zhuǎn)位水平。
　　實驗結(jié)果:在培養(yǎng)的人腎小球系膜細(xì)胞中，
　　(1) AGE-HSA以劑量和時間依賴的方式上調(diào)IL-6和MCP-1表達(dá)（與對照組相比，P＜0.05），而骨化三醇則以劑量依賴的方式抑制AGE-HSA誘導(dǎo)IL-6和MCP-1表達(dá)（與劑量0組比，P＜0.05）;

4、
　　(2)單獨以AGE-HSA處理的細(xì)胞中與對照組相比，維生素D受體的表達(dá)沒有明顯的差異(P＞0.05)，而用骨化三醇處理的細(xì)胞中，維生素D受體的表達(dá)隨骨化三醇濃度增加而增加（與對照組比，P＜0.05）;
　　(3)AGE-HSA以時間依賴的方式上調(diào)IL-6和MCP-1表達(dá)(與對照組相比，P＜0.05)，骨化三醇通過劑量依賴的方式抑制RAGE的表達(dá)(P＜0.05);
　　(4)單獨使用AGE-HSA處理細(xì)胞時，ROS

5、表達(dá)顯著增加，而在加入骨化三醇后，隨骨化三醇濃度的增加，ROS的生成顯著下降(P＜0.05)。
　　(5)在AGE-HSA刺激后5分鐘后，磷酸化NF-κB亞基p65的表達(dá)開始增加，而這種磷酸化表達(dá)將在AGE-HSA刺激后30分鐘達(dá)到最大值（與對照組相比，P＜0.05）;在加入骨化三醇后，磷酸化NF-κB亞基p65的活化被以劑量依賴的方式逐漸降低（與AGE-HSA組相比，P＜0.05）。
　　實驗結(jié)論:在人腎小球系膜細(xì)胞中，骨