Lin28B-let-7信號通路參與胰腺癌化療藥物耐藥性的研究.pdf

1、本文研究目的是通過靶向調(diào)控 Lin28B/let-7基因信號通路，進一步證實Lin28B/let-7之間相互作用的分子機制及其與胰腺癌化療耐藥性的關(guān)系，探討調(diào)控Lin28B/let-7通路改變胰腺癌化療耐藥性的可能性。方法是實驗主要包括胰腺癌AsPC-1細胞的傳代培養(yǎng)、western blotting實驗、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)實驗、實時熒光定量PCR技術(shù)實驗以及MTS細胞活力實驗。實驗大概內(nèi)容：首先構(gòu)建過表達Lin28B質(zhì)粒pCMV6-Lin2

2、8B，基因沉默質(zhì)粒pGFP-shLin28B以及對應(yīng)的空白質(zhì)粒，并分別以相同的條件根據(jù)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染至AsPC-1細胞，western blotting實驗檢測轉(zhuǎn)染后細胞體內(nèi)Lin28B蛋白表達量用以判定質(zhì)粒轉(zhuǎn)染是否成功。其次，提取不同轉(zhuǎn)染后的胰腺癌細胞內(nèi)的總RNA，利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測Let-7 miRNA，Lin28B mRNA的表達量情況。最后，不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的癌細胞與預(yù)先設(shè)定不同濃度的吉西他濱藥物溶液在相同條件下孵育一

3、段時間，MTS細胞活力檢測實驗測定不同處理的細胞對吉西他濱藥物的耐受性。結(jié)果是Western blotting實驗結(jié)果表明，胰腺癌細胞中轉(zhuǎn)染高表達質(zhì)粒的細胞比轉(zhuǎn)染基因沉默質(zhì)粒的細胞中Lin28B表達量顯著性增加，實時熒光定量PCR結(jié)果顯示不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細胞體內(nèi)let-7 miRNA家族表達水平有顯著性差異，同樣Lin28BmRNA也有顯著性不同。MTS細胞活力檢測數(shù)據(jù)表示AsPC-1癌細胞體內(nèi)Lin28B,let-7分子量的不同，導(dǎo)致胰