miR-19a-b與胃癌細(xì)胞多藥耐藥的關(guān)系.pdf

1、背景：腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥(Multidrug Resistance,MDR)是導(dǎo)致胃癌患者化療失敗的主要原因。多藥耐藥的分子機(jī)制極其復(fù)雜,涉及多個(gè)方面,其中包括MicroRNA(miRNA)對(duì)靶基因的異常調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)miR-17-92基因簇的組成miR-17、miR-92a及miR-19a/b被認(rèn)為是成瘤基因而參與調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的多種惡性表型。但是miR-19a/b是否參與胃癌細(xì)胞的多藥耐藥,miR-19a/b在胃癌細(xì)胞多藥耐藥中的作用

2、目前不詳。
　　目的：研究miR-19a/b與胃癌細(xì)胞多藥耐藥的關(guān)系及對(duì)PTEN表達(dá)的影響,為逆轉(zhuǎn)腫瘤的多藥耐藥提供新的靶點(diǎn)。
　　方法：1.應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)miR-19a/b在胃癌耐藥細(xì)胞系中的表達(dá);2.通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染miR-19a/b的模擬物或抑制物,應(yīng)用RT-PCR法驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果;3.應(yīng)用MTT比色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-19a/b對(duì)體外藥物敏感性的影響;4.應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞內(nèi)阿霉素(ADR)熒光強(qiáng)度表明miR-1

3、9a/b對(duì)藥物釋放的影響;5.通過(guò)Annexin-V/PI檢測(cè)miR-19a/b對(duì)藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響;6.應(yīng)用RT-PCR和westernblot檢測(cè)miR-19a/b對(duì)藥物外排和凋亡相關(guān)的分子表達(dá)水平的影響及對(duì)PTEN、AKT和p-AKT的表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：1.miR-19a/b在胃癌耐藥細(xì)胞系SGC7901/ADR和SGC7901/VCR中的表達(dá)與親本SGC7901細(xì)胞相比顯著上調(diào);2.上調(diào)miR-19a/b的

4、表達(dá)可降低胃癌細(xì)胞對(duì)體外藥物的敏感性,反之,下調(diào)miR-19a/b的表達(dá)可增加胃癌細(xì)胞對(duì)體外藥物的敏感性;3.miR-19a/b通過(guò)上調(diào)mdr1和P-gp的水平而增加阿霉素藥物的外排;4.miR-19a/b通過(guò)對(duì)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的調(diào)節(jié)而降低胃癌細(xì)胞對(duì)藥物誘導(dǎo)的凋亡敏感性;5.miR-19a/b抑制PTEN的蛋白表達(dá)水平,增加AKT及p-AKT的表達(dá)水平。
　　結(jié)論：miR-19a/b通過(guò)增加藥物的外排及抑制藥物誘導(dǎo)的