OPA1基因突變對(duì)常染色體顯性視神經(jīng)萎縮的影響.pdf

1、目的： 1.探討中國(guó)人群中常染色體顯性視神經(jīng)萎縮(autosomaldominantopticatrophy，ADOA)發(fā)病的分子機(jī)制。 2.了解OPA1基因c.C1198G(p.P400A)突變對(duì)ADOA臨床表型、外顯率和表現(xiàn)度的影響。 3.分析其他因素(其他核修飾基因、線粒體單體型、個(gè)人因素以及環(huán)境因素等)在疾病的表型表達(dá)、外顯率以及表現(xiàn)度方面的作用。 方法： 1.通過(guò)溫州醫(yī)學(xué)院眼視光醫(yī)院與北

2、京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院、福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院以及全國(guó)各地其他醫(yī)院合作，共同收集視神經(jīng)萎縮家系。經(jīng)溫州醫(yī)學(xué)院倫理道德委員會(huì)及辛辛那提兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)中心委員會(huì)許可，經(jīng)病人及所有受試者同意，簽署知情同意書(shū)，了解家系情況，采集血樣。本課題共收集無(wú)血緣關(guān)系的118例ADOA患者和102例正常對(duì)照血液標(biāo)本。 2.對(duì)該家族中的所有成員進(jìn)行眼科檢查，包括標(biāo)準(zhǔn)對(duì)數(shù)視力表檢測(cè)視力，俞自萍色覺(jué)圖檢查，Humphrey視野計(jì)按程序SITA檢查(Hump

3、hreyVisualFieldAnalyzerIIi，SITAStandard)，德國(guó)羅蘭電生理儀(RolandConsultRETIportgamma，patternorflashVEP)檢查視覺(jué)誘發(fā)電位(visualevokedpotentials，VEP)以及佳能眼底數(shù)碼彩照(CanonCR6-45NMfunduscamera)拍攝眼底照片。 3.提取血液/濾紙片標(biāo)本基因組DNA，對(duì)收集的118例病人樣本進(jìn)行OPA1基因8

4、、9、12和27四個(gè)外顯子所在區(qū)域進(jìn)行篩查。 4.對(duì)攜帶雜合性c.C1198G(p.P400A)突變家系先證者OPA1基因以及線粒體基因組全序列進(jìn)行擴(kuò)增，純化后產(chǎn)物測(cè)序。 5.使用各種生物軟件分析OPA1基因以及線粒體基因組的測(cè)序結(jié)果，找出所有多態(tài)性位點(diǎn)和突變位點(diǎn)，分析其對(duì)線粒體功能的影響。 6.對(duì)攜帶雜合性c.C1198G(p.P400A)突變的家系進(jìn)行限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(restrictionfragmen

5、tlengthpolymorphism，RFLP)分析。 7.收集該家系臨床資料，整理并分析雜合突變c.C1198G(p.P400A)、mtDNA突變以及線粒體單體型與疾病的遺傳特征和臨床表型之間的相關(guān)性。 結(jié)果： 1.篩查發(fā)現(xiàn)一個(gè)攜帶雜合性c.C1198G(p.P400A)突變的四代中國(guó)ADOA家系，而在102例對(duì)照中并未發(fā)現(xiàn)該突變位點(diǎn)。對(duì)該家系成員OPA1基因的外顯子12進(jìn)行擴(kuò)增，測(cè)序結(jié)果顯示：10個(gè)家系成員

6、攜帶該突變，其中8位患病，2位視力表現(xiàn)正常，外顯率為80％，發(fā)病年齡為5～20歲，平均發(fā)病年齡為13.4歲，患病男女之比為1:1。 2.對(duì)該位點(diǎn)所在區(qū)域PCR擴(kuò)增后測(cè)序及RFLP分析，結(jié)果均顯示：c.C1198G(p.P400A)為雜合突變。 3.該家系成員線粒體基因組測(cè)序結(jié)果分析表明：該患者屬于線粒體單體型M9a。 結(jié)論： 1.中國(guó)人群中存在ADOA相關(guān)的雜合突變c.C1198G(p.P400A)，而在