CYP3A5對(duì)環(huán)孢素代謝影響的體外研究.pdf

1、本課題旨在體外通過(guò)CYP3A5基因多態(tài)性對(duì)環(huán)孢素處置影響的研究，為基因?qū)騻€(gè)體化藥物治療在器官移植領(lǐng)域的實(shí)施奠定理論基礎(chǔ)。為此我們進(jìn)行了一系列的研究，首先我們采用PCR-RFLP方法分析CYP3A5*3在中國(guó)漢族人群中的分布特征并進(jìn)行了男女性別間的比較；通過(guò)對(duì)健康受試者和腎移植患者的環(huán)孢素血藥濃度發(fā)分析，我們認(rèn)為CYP3A5*3基因多態(tài)性在男、女性別間的分布與健康人群無(wú)差別，而CYP3A5*3基因多態(tài)性與環(huán)孢素藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)存在一定的關(guān)

2、系；我們還通過(guò)對(duì)肝微粒體的蛋白質(zhì)定量分析和體外藥物孵育實(shí)驗(yàn)，明確了CYP3A5*3基因多態(tài)性與藥物代謝酶活性和酶蛋白量的關(guān)系；最后我們體外重組了的CYP3A5蛋白酶，建立了高產(chǎn)量快速純化的CYP3A原核瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)。研究結(jié)果表明：(1)在中國(guó)漢族人群中CYP3A5*3突變等位基因發(fā)生頻率約為0.724；結(jié)果提示大約54.7％ 的中國(guó)漢族人缺乏CYP3A5藥物代謝酶；不同種族間CYP3A5*3突 變等位基因發(fā)生頻率存在差異；CYP3A

3、5*3突變發(fā)生頻率在男性和女性間無(wú)明顯差異。(2)對(duì)通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證明確了基因型的肝微粒體進(jìn)行 Western-blot檢測(cè)和藥物體外孵育實(shí)驗(yàn)得出：CYP3A5*3攜帶者的蛋白質(zhì)表達(dá)量要低于CYP3A5*l攜帶者；即使是相同的基因型，男性蛋白質(zhì)的表達(dá)量較女性低；取相同CYP3A5酶量的肝微粒體進(jìn)行體外孵育實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)CYP3A5*l樣本對(duì)藥物代謝量明顯高于CYP3A5*3樣本。(3)在對(duì)27名腎移植患者進(jìn)行了PCR-RFLP分析，得出CYP