金雀異黃素的化學(xué)修飾及其衍生物對(duì)胃癌抗腫瘤活性的研究.pdf

1、目的:
　　 1.對(duì)金雀異黃素化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾從而獲得高水溶性衍生物。
　　 2.研究金雀異黃素衍生物對(duì)胃癌的抗腫瘤活性。
　　 方法:
　　 1.通過化學(xué)修飾合成金雀異黃素的水溶性氨酯類衍生物
　　 通過對(duì)金雀異黃素結(jié)構(gòu)修飾，氯乙酰化得到氯乙酰金雀異黃素脂，再胺基化成鹽，得到水溶性衍生物JQ-1。
　　 2.細(xì)胞水平檢測(cè)衍生物JQ-1抗腫瘤活性
　　 2.1 MTT法檢測(cè)

2、　　 SGC-7901細(xì)胞分成對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組:對(duì)照組加入100μL含0.1％DMSO的RMPI-1640培養(yǎng)基;8個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別枷入濃度為400μg/ml、200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml JQ-1溶液各100μL。培養(yǎng)48 h后采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法測(cè)定各組SGC-7901細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。
　　 2.2流式細(xì)胞儀觀測(cè)

3、r>　　 SGC-7901細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)，每孔2mL，實(shí)驗(yàn)設(shè)實(shí)驗(yàn)組(加1ml的50μg/mlJQ-1)和對(duì)照組（不加藥物，加1ml的RMPI-1640培養(yǎng)液），各設(shè)3個(gè)重復(fù)孔，培養(yǎng)48 h后用流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞凋亡情況。
　　 2.3透射電鏡形態(tài)學(xué)觀察
　　 SGC-7901細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)，每孔2mL，實(shí)驗(yàn)設(shè)實(shí)驗(yàn)組(加1ml的50μg/mlJQ-1)和對(duì)照組（不加藥物，加1ml的RMPI-1640培養(yǎng)液），各設(shè)

4、3個(gè)重復(fù)孔，培養(yǎng)48 h固定作切片后用透射電鏡觀察細(xì)胞凋亡情況。
　　 3.用視鼠動(dòng)物模型觀察JQ-1抗腫瘤效果
　　 胃癌SGC-7901細(xì)胞按2*106/ml濃度種植到BALB/C裸鼠腹腔，造模3周。共40只胃癌模型裸鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組和JQ-1治療組，JQ-1治療組將每天腹腔注射1 ml0.001 mol/L JQ-1，連續(xù)給藥4周;模型對(duì)照組每天注射1ml生理鹽水。觀察裸鼠體重，飲食行為、活力等作為動(dòng)物健康情況

5、考察。兩組裸鼠治療前各處死5只裸鼠，第2周起兩組每周處死5只，先稱體重，再處死取出瘤體，稱重，液體石蠟包埋固定病理切片。
　　 結(jié)果:
　　 1.金雀異黃素的化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾對(duì)母體化合物金雀異黃素進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，目前已獲得水溶性衍生物4個(gè)，其中1個(gè)水溶性較好，暫時(shí)命名為JQ-1。
　　 2.金雀異黃素衍生物JQ-1抗腫瘤活性細(xì)胞水平檢測(cè)
　　 2.1用胃癌SGC-7901細(xì)胞進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)，JQ-1對(duì)SGC-7

6、901細(xì)胞半數(shù)抑制率(IC50)為200μg/ml，與對(duì)照組比較，各濃度JQ-1對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞有明顯抑制作用(P＜0.05)，并呈濃度依賴性。
　　 2.2流式細(xì)胞圖表明金雀異黃素JQ-1促進(jìn)胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡。
　　 2.3透射電子顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察征實(shí)，在50μg/mL JQ-1作用于SGC-7901胃癌細(xì)胞24h，出現(xiàn)胞體皺縮、胞質(zhì)凝縮、細(xì)胞質(zhì)失水濃縮，細(xì)胞核發(fā)生典型核染色質(zhì)固縮等現(xiàn)象。

7、　　 3.裸鼠動(dòng)物模型觀察JQ-1抗腫瘤效果
　　 3.1 JQ-1治療組治療后第2周裸鼠瘤重較治療前下降，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，治療后第3、4周裸鼠瘤重較治療前明顯下降(P＜0.05); JQ-1治療組治療后第2、3、4周裸鼠體重與治療前相比較，均無明顯變化(P＞0.05)。治療后兩組裸鼠體重?zé)o明顯差異(P＞0.05)，JQ-1治療組瘤重明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 3.2病理切片提示，與模型對(duì)照