互隔交鏈孢酚對(duì)NIH3T3細(xì)胞中DNA聚合酶β基因的致突變作用.pdf

1、目的：在于觀察互隔交鏈孢酚對(duì)NIH3T3細(xì)胞中DNA聚合酶β基因突變的影響，探討互隔交鏈孢酚致癌可能的機(jī)制，并為進(jìn)一步研究polβ的生物學(xué)功能和特性研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！　》椒ǎ簩⒈狙芯渴覂龃娴腘IH3T3細(xì)胞復(fù)蘇后培養(yǎng)，待其生長(zhǎng)情況良好，用含有不同濃度的互隔交鏈孢酚(AOH)的培養(yǎng)液作用于NIH3T3細(xì)胞，分為五組：①正常細(xì)胞組；②AOH濃度為2μmol/L組；③AOH濃度為4μmol/L組；④AOH濃度為8μmol/L組；⑤AOH濃

2、度為16μmol/L組。首先提取細(xì)胞的總RNA，用RT-PCR方法從細(xì)胞總RNA中擴(kuò)增出DNA聚合酶β基因cDNA序列，應(yīng)用T-A克隆技術(shù)，克隆至pGEM-Teasy載體后，選用JM109菌株，用氯化鈣法制備感受態(tài)細(xì)菌，將目的基因轉(zhuǎn)入宿主細(xì)菌內(nèi)，藍(lán)白篩選、通用引物擴(kuò)增鑒定后，送上海生物工程公司進(jìn)行測(cè)序，用DNASIS、OMIGA軟件分析序列變化，與GenBank中DNA聚合酶β基因序列進(jìn)行比較，分析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及其變化。同時(shí)從細(xì)胞總RNA