小鼠植入前胚胎發(fā)育差異表達(dá)基因變化譜的研究及8-細(xì)胞胚胎緊密化相關(guān)基因Crg1克隆.pdf

1、本課題瞄準(zhǔn)緊密化發(fā)育事件的時(shí)間點(diǎn),收集緊密化發(fā)生前的胚胎——8-細(xì)胞早期胚胎和緊密化剛剛發(fā)生的胚胎--8-細(xì)胞緊密化胚胎兩種標(biāo)本,將SMART-PCR方法與抑制消減雜交技術(shù)(suppression subtractive hybridization,SSH)相結(jié)合,克服取材困難的制約因素,分離、克隆和篩選代表8細(xì)胞早期胚胎和緊密化8細(xì)胞胚胎差別表達(dá)基因的ESTs;并通過生物信息學(xué)方法對(duì)這些EST進(jìn)行同源比較分析,闡明所獲ESTs的生物學(xué)

2、功能.并且在此基礎(chǔ)上,從代表8-細(xì)胞早期胚胎和緊密化8-細(xì)胞胚胎差別表達(dá)基因的ESTs出發(fā),克隆了小鼠植入前胚胎緊密化相關(guān)基因Crgl,并檢測(cè)了該基因的組織表達(dá)譜,運(yùn)用生物信息學(xué)方法對(duì)該基因的功能進(jìn)行了初步分析.研究還表明早期胚胎各個(gè)時(shí)期的基因表達(dá)是處于動(dòng)態(tài)變化之中的.要了解這些表達(dá)變化的基因在胚胎早期發(fā)育的各個(gè)階段起著什么樣的作用,我們首先要弄明白是那些基因發(fā)生了明顯的變化,其表達(dá)變化的模式是怎樣的.然后我們?cè)賮砜催@些有著其自身表達(dá)變

3、化模式的基因具有什么功能,它們?cè)诎l(fā)育過程中起著什么作用.為避免收集足夠數(shù)量的早期胚胎而耗費(fèi)大量的時(shí)間、精力和經(jīng)費(fèi),我們充分利用網(wǎng)上的各種生物信息資源,借助公共的ESTs數(shù)據(jù)庫,利用NCBI中的數(shù)字差異展示(digital differential display,DDD)軟件,以及前人已構(gòu)建的早期胚胎六個(gè)時(shí)期的cDNA文庫,調(diào)查早期胚胎發(fā)育過程中各個(gè)階段的基因表達(dá)譜系的變化.進(jìn)一步根據(jù)表達(dá)差異基因在各個(gè)時(shí)期的表達(dá)量及變化趨勢(shì)進(jìn)行歸類列表