水稻金屬離子轉(zhuǎn)運體基因OsMTP1的克隆與功能分析.pdf

1、　　本文采用電子克隆方法，以公布的小鼠鋅離子轉(zhuǎn)運體蛋白基因ZnT-2的氨基酸序列為信息探針，運行BLAST程序搜索GenBank的水稻基因組數(shù)據(jù)庫，該探針與位于水稻第五條染色體上的重疊群Ctg010807高度同源，搜索EST庫并經(jīng)人工序列拼接、基因組結(jié)構(gòu)預測軟件FGENSH-M分析，拼接獲得了1，685bp的水稻金屬離子轉(zhuǎn)運體基因的cDNA序列，進一步通過RT-PCR的方法克隆了該基因的全長cDNA,命名為OsMTP1。　　經(jīng)NCBI

2、序列搜索證實：OsMTP1是迄今為止唯一從單子葉植物克隆到的CDF成員。該基因只有一個外顯子，完整的ORF編碼418個氨基酸殘基，該cDNA全序列在GenBank中的登錄號為：AY266290。OsMTP1與其他CDF家族成員如AtMTP1、AsMTP1、TaMTP1、TgMTP1t1、TgMTP1t2、TmMTP1和PtdMTP1氨基酸的一致性為62～67﹪，相似性為70～77﹪。所有這些蛋白都有6個跨膜區(qū)(TM)，其中絕大多數(shù)都有富

3、組氨酸的可變區(qū)?！　“攵縍T-PCR分析的結(jié)果表明，OsMTP1在被檢測的水稻組織中呈組成性表達，但在葉中的表達要高于其他組織。不同濃度鋅處理時，OsMTP1的表達量隨鋅濃度的升高而增加。受過量鋅和鎘處理的水稻幼苗中，OsMTP1的表達顯著增加。當植株受不同濃度Cu，F(xiàn)e，Mg處理時，OsMTP1的表達量稍有提高。利用農(nóng)桿菌介導法將OsMTP1::GUS融合基因轉(zhuǎn)化到洋蔥表皮細胞中后，顯微觀察證實OsMTP1位于細胞的質(zhì)膜上。由此推

4、測OsMTP1的作用可能是將重金屬離子外排到細胞間隙中。　　通過構(gòu)建酵母表達載體，進行OsMTP1的酵母表達分析。結(jié)果表明，在菌液濃度為OD600=0.5和0.05時，含pFL61-OsMTP1的菌株對150mMZnSO4的耐受性要明顯高于轉(zhuǎn)空載體pFL61的菌株，證明OsMTP1的表達能夠提高轉(zhuǎn)基因酵母耐鋅脅迫的能力。用農(nóng)桿菌介導法將pBI121-OsMTP1成功轉(zhuǎn)化進煙草植株后，得到了6株P(guān)CR檢測結(jié)果為陽性的植株，對其中兩株進行