版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、近年來研究發(fā)現(xiàn),LRIGs基因家族在多種腫瘤中具有抑癌作用,其可能的機(jī)制是下調(diào)EGFR的表達(dá),從而抑制EGF對(duì)人體腫瘤所帶來的促細(xì)胞增殖、侵襲等作用。但其在膀胱癌中的作用報(bào)道甚少,本研究檢測(cè)了LRIG3基因及蛋白在膀胱癌中的表達(dá),并將其重組腺病毒質(zhì)粒感染人膀胱癌T24細(xì)胞系,觀察了LRIG3對(duì)T24細(xì)胞生長、凋亡及遷移的影響等,分三個(gè)部分簡述如下。
第一部分:LRIG3 蛋白及基因在膀胱腫瘤中的表達(dá)及意義
目
2、的:了解LRIG3蛋白及基因在膀胱腫瘤和正常膀胱組織中的表達(dá)及其與膀胱腫瘤不同分級(jí)、分期之間的關(guān)系。
方法:采用免疫組化SP法和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)64例膀胱尿路上皮癌組織和12例正常膀胱粘膜中LRIG3蛋白及mRNA的表達(dá)情況,并結(jié)合臨床資料進(jìn)行分析。
結(jié)果:膀胱癌組織中LRIG3 蛋白和mRNA的表達(dá)水平顯著低于正常膀胱黏膜組織;且分級(jí)和分期越高,LRIG3蛋白和mRNA的表達(dá)水平越
3、低。
結(jié)論:LRIG3基因在膀胱癌中存在表達(dá)缺失和低表達(dá),提示LRIG3基因在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中可能具有抑癌基因的作用,有可能成為腫瘤基因治療的又一靶點(diǎn)。
第二部分:LRIG3基因特異性腺病毒表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
目的: 構(gòu)建并鑒定含有LRIG3基因的腺病毒表達(dá)載體rAd-LRIG3,并感染人膀胱癌細(xì)胞T24,為后期檢測(cè)LRIG3對(duì)膀胱癌生物學(xué)行為的影響提供靶細(xì)胞。
方法:通過質(zhì)粒
4、提取、瓊脂糖凝膠電泳、酶切、連接、轉(zhuǎn)化等多種基因工程技術(shù),從感受態(tài)大腸桿菌DH5α菌株中提取并大量制備pLRIG3-EGFP真核表達(dá)質(zhì)粒,然后對(duì)其行限制性內(nèi)切酶酶切、凝膠電泳法進(jìn)行鑒定。測(cè)序正確后,利用腺病毒載體系統(tǒng)Adeno-X構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒pAd-LRIG3,酶切、PCR鑒定重組腺病毒質(zhì)粒,鑒定正確后,將pAd-LRIG3轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞,包裝成復(fù)制缺陷型腺病毒質(zhì)粒rAd-LRIG3。大量擴(kuò)增rAd-LRIG3,測(cè)病毒滴度
5、。實(shí)驗(yàn)分為三組:實(shí)驗(yàn)組(T24-LRIG3組,感染rAd-LRIG3)、對(duì)照組(T24組,未感染腺病毒質(zhì)粒)和感染空載體組(T24-HK組,感染rAd-HK)。感染48小時(shí)后,應(yīng)用RT-PCR及Western-Blotting鑒定該質(zhì)粒在細(xì)胞中是否得到表達(dá)。
結(jié)果:酶切分析、測(cè)序鑒定表明rAd-LRIG3構(gòu)建成功;RT-PCR及W-B分析表明,T24-LRIG3組中LRIG3mRNA及蛋白的表達(dá)水平較T24-HK組和T24
6、組明顯升高,差異有顯著性(P<0.05)。
結(jié)論: 攜帶有LRIG3基因的重組腺病毒構(gòu)建成功;建立了rAd-LRIG3感染人膀胱癌細(xì)胞T24的長期穩(wěn)定細(xì)胞系??赡転閷ふ野螂装┑挠行Щ蛑委熗緩降於ɑA(chǔ)。
第三部分:LRIG3基因?qū)Π螂装┘?xì)胞T24 生物學(xué)行為的影響
目的:研究LRIG3基因?qū)Π螂装┘?xì)胞T24生物學(xué)行為的影響。以判斷LRIG3基因在膀胱癌的發(fā)生和進(jìn)展方面是否具有作用;進(jìn)而說明LRI
7、G3基因是否是膀胱癌病因?qū)W中的一個(gè)抑癌基因。
方法:利用重組腺病毒質(zhì)粒rAd-LRIG3感染膀胱癌細(xì)胞T24,得到穩(wěn)定細(xì)胞株T24-LRIG3,細(xì)胞計(jì)數(shù)并繪制細(xì)胞生長曲線;Hoechst33258 染色、透射電鏡、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)觀察感染后細(xì)胞侵襲能力的變化。實(shí)驗(yàn)分為三組:實(shí)驗(yàn)組(T24-LRIG3組,感染rAd-LRIG3)、對(duì)照組(T24組,未感染腺病毒質(zhì)粒)和感染空載體組(T24-HK組,感染
8、rAd-HK)。
結(jié)果:MTT法觀察顯示,感染rAd-LRIG3后細(xì)胞生長增殖速度較未感染組和空載體感染組明顯減慢;Hoechst33258 染色及透射電鏡顯示部分細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)改變;流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)表明感染LRIG3基因后,T24細(xì)胞出現(xiàn)較為明顯的凋亡峰;細(xì)胞遷移力顯著低于未轉(zhuǎn)染組和空載體轉(zhuǎn)染組。
結(jié)論:LRIG3基因能有效抑制膀胱癌細(xì)胞的生長增殖和遷移,并誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡,是膀胱癌病因?qū)W中的一個(gè)抑癌基
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- LRIG3在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及體內(nèi)外干擾LRIG3表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- TACC3表達(dá)對(duì)膀胱尿路上皮癌T24細(xì)胞系遷移和侵襲的影響.pdf
- ANLN基因在膀胱尿路上皮癌中的作用及機(jī)制研究.pdf
- 14-3-3σ蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌中的表達(dá).pdf
- PTEN基因和FHIT基因在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)和意義.pdf
- Galectin-3在腎細(xì)胞癌和膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及意義.pdf
- DEK在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及腎移植術(shù)后尿路上皮癌特點(diǎn).pdf
- LRIG2基因和蛋白在膀胱腫瘤中的表達(dá)及重組質(zhì)粒載體pCMV-LRIG2轉(zhuǎn)染BIU-87細(xì)胞株的效應(yīng)研究.pdf
- EZH2基因在膀胱尿路上皮癌及腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf
- LRIG3基因在三種膀胱癌細(xì)胞系中的表達(dá)及對(duì)其細(xì)胞周期、侵襲性和凋亡的影響.pdf
- RUNX3基因在膀胱癌T24細(xì)胞株中的表達(dá)以及對(duì)凋亡的影響.pdf
- SATB1基因在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及其臨床意義.pdf
- HMGB1在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及其對(duì)T24細(xì)胞株生物學(xué)行為影響的研究.pdf
- 膀胱尿路上皮癌ILK基因表達(dá)及沉默ILK基因的相關(guān)研究.pdf
- hepaCAM基因在膀胱癌中表達(dá)及對(duì)T24細(xì)胞生物學(xué)影響.pdf
- Tim-3在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及其臨床意義.pdf
- PTCH1基因在人膀胱尿路上皮癌細(xì)胞中的低表達(dá)及臨床意義.pdf
- Beclin1和LC3在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及意義.pdf
- LRIG1抑制EGFR入核增強(qiáng)順鉑對(duì)T24膀胱癌細(xì)胞損傷的研究.pdf
- KLF4在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及意義.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論