歐亞旋覆花總黃酮對衰老骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、本文闡述了歐亞旋覆花總黃酮對衰老骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的保護(hù)作用。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：大鼠原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定。
　　目的：
　　大鼠BMSCs體外分離、培養(yǎng)、純化，觀察細(xì)胞形態(tài)、鑒定細(xì)胞表面標(biāo)志物及細(xì)胞多向分化能力。
　　方法：
　　在體外通過全骨髓貼壁法培養(yǎng)大鼠BMSCs，并進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物及細(xì)胞周期分布，分別向成脂、成骨方向誘導(dǎo)分化。
　　結(jié)果：

2、
　　大鼠BMSCs是呈放射狀排列的梭形細(xì)胞集落，可連續(xù)穩(wěn)定傳代3代以上。第3代BMSCs的表面標(biāo)志物CD29、CD44、CD90均呈陽性表達(dá)，而CD11b呈陰性表達(dá)。成脂、成骨誘導(dǎo)分化好，油紅O染色和茜素紅染色均呈陽性。細(xì)胞周期分析顯示BMSCs符合正常細(xì)胞生長特征且生長活躍。
　　結(jié)論：
　　全骨髓貼壁法培養(yǎng)大鼠BMSCs較易分離、純化、擴(kuò)增細(xì)胞，所獲細(xì)胞對實(shí)驗(yàn)研究具有重大意義。
　　第二部分：探索D-半乳糖

3、誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞衰老的最佳作用濃度。
　　目的：
　　探索構(gòu)建D-gal誘導(dǎo)BMSCs衰老的最佳作用濃度。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)分組如下：正常對照組（Control組）；低濃度組（L組，BMSCs+10g/L D-gal）；中濃度組（M組，BMSCs+20g/LD-gal）；高濃度組（H組，BMSCs+40g/L D-gal）。CCK-8法檢測細(xì)胞增殖率，試劑盒檢測 SOD活性及 MDA含量，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)

4、胞凋亡，Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl2、cleaved-caspase-3的表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　L、M、H組的細(xì)胞增殖能力較 Control組顯著降低（P均＜0.01），且隨濃度增高增殖率逐漸降低，M、H組與L組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。3種濃度的D-gal誘導(dǎo)的細(xì)胞ROS及MDA含量較Control組顯著升高（P均＜0.01），且隨D-gal濃度增加ROS及MDA含量逐漸升高，

5、M、H組與 L組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。3種濃度的D-gal誘導(dǎo)的細(xì)胞SOD活性較Control組顯著降低（P均＜0.01），且隨濃度升高SOD活性逐漸降低，M組與L組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.07），H組與 L組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。3種濃度的D-gal誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡較Control組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），但隨著濃度增高，凋亡逐漸降低，M組與L組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.

6、105），H組與L組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且M和H組主要引起細(xì)胞晚期凋亡和壞死。3種濃度的D-gal誘導(dǎo)的細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白cleaved-caspase-3的表達(dá)及Bax/Bcl2較Control組顯著增加（P均＜0.01），但各實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　D-gal可誘導(dǎo) BMSCs發(fā)生衰老，這可能與 D-gal促使BMSCs內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高導(dǎo)致細(xì)胞凋亡有關(guān)。但