重組人EPO對rhIL-6誘導(dǎo)人原代肝細(xì)胞和HepG2細(xì)胞Hepcidin mRNA表達(dá)的抑制作用.pdf

1、研究背景：慢性病貧血(ACD)，常見于慢性感染、腫瘤及風(fēng)濕免疫疾病，對患者的生活質(zhì)量與預(yù)后可造成嚴(yán)重影響。ACD發(fā)生的機(jī)制為腸道鐵吸收障礙和網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)鐵扣留，新發(fā)現(xiàn)的小分子肽hepcidin被證實(shí)在這一過程中起核心作用。Hepcidin是一種急性期蛋白，在肝細(xì)胞中合成，通過內(nèi)化降解小腸上皮基底面和巨噬細(xì)胞表面的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)受體FN1，干擾了鐵從腸道的吸收和從巨噬細(xì)胞的釋放。IL-6等細(xì)胞因子在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)促進(jìn)其合成方面有重要作用，被認(rèn)為是

2、ACD的關(guān)鍵介導(dǎo)物。實(shí)驗(yàn)證實(shí)外源性EPO能降低正常小鼠與ACD小鼠肝臟的HepcidinmRNA水平，改善ACD程度。但是EPO是否能改變?nèi)烁渭?xì)胞HepcidinmRNA表達(dá)尚未被闡明。 研究目的： 1.通過不同培養(yǎng)條件下人原代肝細(xì)胞培養(yǎng)，模擬體內(nèi)ACD狀態(tài)，觀察Hepcidin表達(dá)的變化。 2.探索EPO對原代肝細(xì)胞及肝細(xì)胞株的Hepcidin表達(dá)影響，探討rhEPO在ACD治療方面的可能機(jī)制。 研究方

3、法： 1.建立新鮮離體人原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)條件，并進(jìn)行HepG2人肝腫瘤細(xì)胞系細(xì)胞的培養(yǎng)。 2.人原代肝細(xì)胞與HepG2人肝癌細(xì)胞培養(yǎng)液中加入不同濃度的rhIL-6、rhEPO、rhIL-6+rhEPO，作用不同時(shí)間。 3.提取mRNA，RT-PCR后進(jìn)行紫外熒光顯像，以Hepcidin與G3PDH的mRNA比值進(jìn)行半定量分析：比較不同條件下，人原代肝細(xì)胞及肝腫瘤細(xì)胞HepcidinmRNA的表達(dá)情況。 研

4、究結(jié)果： 1.重組人IL-6能刺激HepG2細(xì)胞HepcidinmRNA表達(dá)升高，并隨時(shí)間變化，24小時(shí)達(dá)峰值。重組人EPO對IL-6刺激HepcidinmRNA表達(dá)有一定的抑制作用。單純r(jià)hEPO作用于HepG2細(xì)胞，Hepcidin表達(dá)基本無變化。 2.隨rhIL-6劑量的增加，HepcidinmRNA表達(dá)逐漸上升。rhIL-6的濃度20ng/ml時(shí)最高，在此后升高趨勢不明顯。 3.rhIL-6劑量一定的情況

5、下，給予不同劑量的rhEPO，可以觀察到EPO對Hepcidin表達(dá)升高的抑制作用。培養(yǎng)液中rhEPO濃度達(dá)到0.5-2.0U/ml時(shí)，抑制效果最為顯著，而EPO濃度進(jìn)一步升高到4-8U/ml，Hepcidin表達(dá)未見進(jìn)一步抑制。 4.重組人IL-6能使人原代肝細(xì)胞HepcidinmRNA表達(dá)明顯增加，rhEPO對rhIL-6刺激Hepcidin表達(dá)有抑制作用。 結(jié)論： 1.重組人IL-6能刺激HepG2細(xì)胞He