LRRC4基因對腦膠質瘤細胞蛋白質表達譜的影響.pdf

1、LRRC4是一個腦組織相對特異性表達基因,是采用表達序列標簽(EST)介導的定位、候選克隆策略結合5’-RACE技術從染色體7q31～32區(qū)域克隆出來的一個富亮氨酸重復(LRR)超家族的新成員。LRRC4是神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育與軸突生長的功能基因,其表達與膠質瘤的級別進展呈負相關,LRRC4的表達缺失參與腦膠質瘤進展的晚期事件。LRRC4能夠下調一系列神經(jīng)生長因子或受體(如IGF,EGF,PDGF,CNTF,bFGF,GDNF和BDNF等)的表

2、達,通過調控多種信號轉導通路(K-Ras/c-Raf/ERK/MAPK,PI-3K/AKT/NF-κB,p70S6/PKC,STAT3以及JNK2/c-Jun/mp53等)將U251細胞阻滯在G1晚期,抑制腦膠質瘤細胞的增殖和侵襲,而且這種抑制作用依賴于它的LRR結構域。
　　 本研究應用熒光差異凝膠電泳(DIGE)和質譜(MALDI-TOF-MS)分析技術比較LRRC4基因轉染腦膠質瘤U251細胞前后的差異表達蛋白質譜,闡明L

3、RRC4對腦膠質瘤U251細胞蛋白質表達譜的影響,進一步揭示LRRC4抑瘤的分子機制。通過DIGE分析,以差異表達大于2倍為標準篩選差異蛋白質點14個,經(jīng)質譜鑒定出11個蛋白質,其中上調蛋白質為5個:Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)；Rho GDPdissociation inhibitor alpha(ARHGDIA)；heat shock protein27(HSP27)

4、；translationally-controlled1(TPT1)；Chain A,SolutionStructure Of Recombinant Human Brain-Type Fatty Acid BindingProtein。下調蛋白質為6個:haymaker protein；acetyl-Coenzyme Aacetyltransferase2(ACAT2)；Chain A,Endoplasmic Reticulum Pr

5、oteinRp19 O95881(ERP19)；stathmin1；Chain A,Human Platelet ProfilinComplexed With An L-Pro10-iodotyrosine Peptide；S100 calciumbinding protein A11(S100A11)。這些差異蛋白質涉及細胞代謝、增殖、翻譯、信號轉導等眾多事件,表明LRRC4基因轉染U251細胞后可能通過調控這些蛋白質的表達而參與增殖

6、、黏附、趨化和侵襲等生物學過程。
　　 LRRC4調控的差異蛋白質的驗證
　　 1、Western Blot方法的驗證結果
　　 通過Western blot驗證了ACAT2,ARHGDIA,ERP19,HSP27,Stathmin1,TPT1,S100A11等7個蛋白質在LRRC4基因轉染U251細胞前后的表達變化。發(fā)現(xiàn),ACAT2,ERP19、Stathmin1、S100A11在LRRC4基因轉染U251細胞

7、后表達下調,ARHGDIA,HSP27,TPT1在LRRC4基因轉染U251細胞后表達上調,與DIGE和質譜鑒定結果一致。
　　 2、免疫組織化學方法的驗證結果
　　 為了進一步證實上述實驗結果,本研究選擇了stathmin1和S100A11兩個與細胞增殖相關的基因產(chǎn)物,采用免疫組織化學的方法檢測了它們在不同臨床分級的星形膠質瘤活檢組織中的表達情況,發(fā)現(xiàn),Stathmin1和S100A11隨著星形膠質瘤級別的增加而表達升