LRRC4基因?qū)δX膠質(zhì)瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響.pdf

1、LRRC4是一個(gè)腦組織相對(duì)特異性表達(dá)基因,是采用表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)介導(dǎo)的定位、候選克隆策略結(jié)合5’-RACE技術(shù)從染色體7q31～32區(qū)域克隆出來的一個(gè)富亮氨酸重復(fù)(LRR)超家族的新成員。LRRC4是神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育與軸突生長的功能基因,其表達(dá)與膠質(zhì)瘤的級(jí)別進(jìn)展呈負(fù)相關(guān),LRRC4的表達(dá)缺失參與腦膠質(zhì)瘤進(jìn)展的晚期事件。LRRC4能夠下調(diào)一系列神經(jīng)生長因子或受體(如IGF,EGF,PDGF,CNTF,bFGF,GDNF和BDNF等)的表

2、達(dá),通過調(diào)控多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路(K-Ras/c-Raf/ERK/MAPK,PI-3K/AKT/NF-κB,p70S6/PKC,STAT3以及JNK2/c-Jun/mp53等)將U251細(xì)胞阻滯在G1晚期,抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲,而且這種抑制作用依賴于它的LRR結(jié)構(gòu)域。
　　 本研究應(yīng)用熒光差異凝膠電泳(DIGE)和質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)分析技術(shù)比較LRRC4基因轉(zhuǎn)染腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞前后的差異表達(dá)蛋白質(zhì)譜,闡明L

3、RRC4對(duì)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響,進(jìn)一步揭示LRRC4抑瘤的分子機(jī)制。通過DIGE分析,以差異表達(dá)大于2倍為標(biāo)準(zhǔn)篩選差異蛋白質(zhì)點(diǎn)14個(gè),經(jīng)質(zhì)譜鑒定出11個(gè)蛋白質(zhì),其中上調(diào)蛋白質(zhì)為5個(gè):Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)；Rho GDPdissociation inhibitor alpha(ARHGDIA)；heat shock protein27(HSP27)

4、；translationally-controlled1(TPT1)；Chain A,SolutionStructure Of Recombinant Human Brain-Type Fatty Acid BindingProtein。下調(diào)蛋白質(zhì)為6個(gè):haymaker protein；acetyl-Coenzyme Aacetyltransferase2(ACAT2)；Chain A,Endoplasmic Reticulum Pr

5、oteinRp19 O95881(ERP19)；stathmin1；Chain A,Human Platelet ProfilinComplexed With An L-Pro10-iodotyrosine Peptide；S100 calciumbinding protein A11(S100A11)。這些差異蛋白質(zhì)涉及細(xì)胞代謝、增殖、翻譯、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等眾多事件,表明LRRC4基因轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞后可能通過調(diào)控這些蛋白質(zhì)的表達(dá)而參與增殖

6、、黏附、趨化和侵襲等生物學(xué)過程。
　　 LRRC4調(diào)控的差異蛋白質(zhì)的驗(yàn)證
　　 1、Western Blot方法的驗(yàn)證結(jié)果
　　 通過Western blot驗(yàn)證了ACAT2,ARHGDIA,ERP19,HSP27,Stathmin1,TPT1,S100A11等7個(gè)蛋白質(zhì)在LRRC4基因轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞前后的表達(dá)變化。發(fā)現(xiàn),ACAT2,ERP19、Stathmin1、S100A11在LRRC4基因轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞

7、后表達(dá)下調(diào),ARHGDIA,HSP27,TPT1在LRRC4基因轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞后表達(dá)上調(diào),與DIGE和質(zhì)譜鑒定結(jié)果一致。
　　 2、免疫組織化學(xué)方法的驗(yàn)證結(jié)果
　　 為了進(jìn)一步證實(shí)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本研究選擇了stathmin1和S100A11兩個(gè)與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因產(chǎn)物,采用免疫組織化學(xué)的方法檢測了它們在不同臨床分級(jí)的星形膠質(zhì)瘤活檢組織中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn),Stathmin1和S100A11隨著星形膠質(zhì)瘤級(jí)別的增加而表達(dá)升