注射用核介素藥代動力學(xué)研究.pdf

1、本文對注射用核介素藥代動力學(xué)進行了研究，研究工作分為兩部分： 第一部分：建立高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法，測定犬血漿、大鼠組織(包括心、腦、胃、腎、脾、肺、肝、脂肪、骨骼肌、小腸、睪丸)以及排泄物(包括尿、膽汁、糞便)中白屈菜紅堿的濃度，為注射用核介素的藥代動力學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。 研究方法： ①生物樣品的處理：血漿：取血漿樣品0.2ml，加入內(nèi)標(biāo)溶液，旋渦混合2分鐘，加入60μl10％的三氯醋酸溶液混懸1分鐘，離心

2、12000rpm×10分鐘，取上清50μl進樣。 組織：取各組織樣品(心、腦、胃、腎、脾、肺、肝、脂肪、骨骼肌、小腸、睪丸)稱重0.5g，加入5ml生理鹽水制成勻漿后離心，取上清液0.2ml，加入內(nèi)標(biāo)溶液，旋渦混合2分鐘，加入60μl10％的三氯醋酸溶液混懸1分鐘，離心12000rpm×10分鐘，取上清50μl進樣。 排泄物：取膽汁、尿和糞便預(yù)處理液(0.5g糞便加入生理鹽水5ml制成勻漿，離心取上清)各0.2ml，加入

3、內(nèi)標(biāo)溶液，旋渦混合2分鐘，加入60μl10％的三氯醋酸溶液混懸1分鐘，離心12000rpm×10分鐘，取上清50μl進樣。 ②色譜條件：選擇色譜柱AgilentC18分析柱(2.1×50mm5u)，調(diào)整流動相的組成、配比和流速使白屈菜紅堿色譜峰完全分離。質(zhì)譜條件為電噴霧離子源(ESI)，干燥氣(N2)流速：260L/hr，毛細管電噴霧電壓：3.0KV，錐孔(cone)電壓：30V，錐孔提取電壓(extractor)：5.0V，電

4、離源溫度：115℃，脫溶劑氣溫度：250℃，確定離子檢測方式，確定最佳選擇離子。 ③標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍：配制系列濃度的白屈菜紅堿對照品溶液，進樣測定，以白屈菜紅堿的濃度為橫坐標(biāo)，白屈菜紅堿峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 ④回收率及精密度試驗：取空白血漿分別加入不同濃度的白屈菜紅堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成高、中、低三個濃度的樣品，每個濃度5份，按“生物樣品處理”項下方法處理后進樣，記錄峰面積。 ⑤重現(xiàn)性試

5、驗：取空白血漿加入不同濃度白屈菜紅堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成高、中、低三個濃度的樣品，每個濃度5份，按“生物樣品處理”項下方法處理后進樣，考察方法的日內(nèi)、日間重現(xiàn)性。 ⑥靈敏度：以信噪比S/N(3：1)時相應(yīng)的白屈菜紅堿的濃度為最低檢測濃度。 ⑦樣品的穩(wěn)定性考察：考察血漿樣品在冷凍、反復(fù)凍融、處理前、后在室溫放置等條件下樣品的穩(wěn)定性。 研究結(jié)果： ①色譜條件的確定：通過試驗確定最佳色譜條件為：C18分析柱(2.1

6、×50mm5u)，柱溫：30℃；流速：0.25ml/min；流動相：乙腈：水(含0.75％乙酸)=30：70。通過試驗確定采用正離子檢測方式，選擇性離子為m/z：384.1(白屈菜紅堿[M+H]+)，m/z：354.0(白屈菜堿[M+H]+)。 ②標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：犬血漿中白屈菜紅堿在50-6400ng/ml的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)0.9997；大鼠各組織和排泄物中白屈菜紅堿在不同濃度范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)

7、系數(shù)均大于0.9960。 ③回收率及精密度試驗：在犬血漿和大鼠各組織中白屈菜紅堿的高、中、低三個濃度的平均回收率和RSD分別為96.0％(2.52)，87.5％(2.29)，92.3％(5.05)；在大鼠各組織和排泄物中，白屈菜紅堿的高、中、低三個濃度的回收率良好，RSD％小于10％ ④重現(xiàn)性試驗：白屈菜紅堿在血漿中的日內(nèi)和日間重現(xiàn)性良好，高、中、低三個濃度的日內(nèi)和日間的RSD％分別小于8％和10％。 ⑤靈敏度：

8、犬血漿中的最低檢測限為5ng/ml，在大鼠的組織及排泄物中的最低檢測限為0.5ng/ml。 ⑥樣品穩(wěn)定性考察：樣品在室溫放置、冷凍及反復(fù)凍融條件下穩(wěn)定，室溫放置24小時、冷凍儲藏4周及反復(fù)凍融4次后，變異小于10％，說明樣品在上述條件下穩(wěn)定。 研究結(jié)論：本文建立了注射用核介素中白屈菜紅堿在犬血漿、大鼠的組織、膽汁、尿液和糞便中的HPLC-MS測定方法，方法的專屬性好，靈敏度高，準(zhǔn)確性好；生物樣品的制備過程簡便，容易操作.

9、該方法適用于注射用核介素藥代動力學(xué)的研究。 第二部分：觀測注射用核介素在Beagle犬及大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)，為臨床應(yīng)用作參考。 研究方法： 1.犬血漿樣品的處理：Beagle犬9條，隨機分為3組，小劑量組3只、中劑量組3只、大劑量組3只。三組分別靜脈注射注射用核介素1、3及9mg/kg，于給藥后2、5、10、30、60、180、300、600、1440min分別取血，分離血漿備用。 取0.2ml血漿，按

10、照血漿樣品處理方法處理后直接進樣。從血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線計算犬血漿中白屈菜紅堿的濃度。采用藥代動力學(xué)軟件3P87程序，以3條犬各個相應(yīng)時間的血藥濃度計算藥代動力學(xué)參數(shù)。 2.大鼠組織樣品的處理：大鼠10只，每5只大鼠為一組，靜脈注射注射用核介素3mg/kg，分別于用藥后5分鐘及2小時斷頭處死，放血后取其心、肝、腦、腎、脾、胃、小腸、睪丸、脂肪、骨骼肌和肺，稱重0.5g，加5ml生理鹽水制成勻漿后，3000rpm，離心10分鐘，取上清液0

11、.2ml，按組織樣品的處理方法處理后，取上清液50μl，直接進樣。計算每克組織的藥物含量。 3.大鼠排泄物的處理：大鼠6只，收集空白尿和糞后，靜脈注射注射用核介素3mg/kg，收集給藥后1、5、10、24小時的尿和糞。取不同時間的尿液作為尿樣預(yù)處理液。取不同時間的糞便稱重后，研磨均勻，取0.5g加5ml生理鹽水制成勻漿后，取上清液作為預(yù)處理液。 大鼠10只在乙醚麻醉下進行膽管插管，收集空白膽汁，靜脈注射注射用核介素3mg

12、/kg，收集給藥后1、5、10、24小時的膽汁。取不同時間的膽汁作為膽汁預(yù)處理液。 分別取膽汁、尿和糞預(yù)處理液0.2ml，按膽汁、尿和糞樣品的處理方法處理后，直接進樣測定白屈菜紅堿含量。計算不同時間的排泄量和排泄率及24小時內(nèi)總排泄量和排泄率。 研究結(jié)果： 1.犬血漿中白屈菜紅堿的濃度：給犬靜脈注射注射用核介素后，血中白屈菜紅堿迅速達峰濃度，消除半衰期平均約為47分鐘，所靜注的三個劑量組，AUC分別為12.5、5

13、5.6及122.4(mg/L)min，清除率分別為0.086、0.067及0.088L/kg/min。靜注后，白屈菜紅堿的血藥濃度-時間曲線呈二室模型 2.大鼠組織中白屈菜紅堿的分布：大鼠靜脈注射注射用核介素后，藥物在所測定的各組織中均有分布，其中以肺臟、腎臟和脾臟分布最多，心臟和小腸分布較少。 3.大鼠體內(nèi)白屈菜紅堿的排泄：大鼠以注射用核介素3mg/kg靜脈注射后24小時，在尿、糞和膽汁中白屈菜紅堿排泄總量分別為注射劑