D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽(yáng)離子脂質(zhì)體的研制.pdf

1、目的：鹽酸伊立替康(CPT-11)是一種水溶性的喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物，已經(jīng)被證實(shí)對(duì)結(jié)腸腫瘤和肺泡小細(xì)胞腫瘤有較好的抗腫瘤活性。它的作用機(jī)理是依靠它內(nèi)部的共價(jià)結(jié)構(gòu)作用于拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ和DNA之間來(lái)產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用，阻止兩條DNA單鏈的結(jié)合，使DNA與拓?fù)洚悩?gòu)酶I的復(fù)合物增加，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。對(duì)于所有的喜樹(shù)堿類(lèi)藥物來(lái)說(shuō)，這種抗腫瘤功能的發(fā)揮都依賴(lài)于結(jié)構(gòu)中內(nèi)酯環(huán)的完整性。但是在生理的pH條件下，內(nèi)酯環(huán)容易發(fā)生水解反應(yīng)，生成沒(méi)有活性的羧酸類(lèi)衍生物。因

2、此，包括脂質(zhì)體在內(nèi)的很多藥物載體技術(shù)都被用來(lái)保護(hù)內(nèi)酯環(huán)的穩(wěn)定性。保護(hù)其內(nèi)酯環(huán)形式是將藥物鑲嵌在脂質(zhì)體雙分子層中或者將其包封在pH值較低的內(nèi)水相中。將CPT-11包封在由硫酸銨提供的脂質(zhì)體酸性的內(nèi)水相中，有助于維持藥物的內(nèi)酯環(huán)形式。
　　 D-甘露糖是具有3，4-OH的單糖，能夠被肺泡表面的活性蛋白A和D識(shí)別。所以在制備脂質(zhì)體的同時(shí)添加D-甘露糖來(lái)修飾脂質(zhì)體，能夠使脂質(zhì)體更多的濃集在肺部，增加脂質(zhì)體的肺部靶向性。
　　 另

3、一方面，在制備脂質(zhì)體時(shí)加入一定量的十八胺除了可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)體表面所帶電荷，使脂質(zhì)體對(duì)主藥的包封率增加，還可以防止脂質(zhì)體之間相互聚集，增加脂質(zhì)體在體外的穩(wěn)定性。
　　 基于以上原因，本試驗(yàn)以CPT-11為模型藥物，在制備脂質(zhì)體時(shí)同時(shí)添加十八胺和D-甘露糖，使藥物更多的富集在肺部，減少給藥劑量，降低不良反應(yīng)，提高藥物對(duì)肺部腫瘤的治療指數(shù)。
　　 方法：在查閱相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，初步確定D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽(yáng)離子脂質(zhì)

4、體的制備方法，以包封率為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)影響包封率的主要制備工藝和處方因素進(jìn)行考察，得出了最佳的制備工藝條件和對(duì)包封率影響較大的處方因素。然后在上述單因素考察的基礎(chǔ)上，以藥物與磷脂質(zhì)量比，膽固醇和磷脂質(zhì)量比，十八胺和磷脂質(zhì)量比，D-甘露糖和磷脂質(zhì)量比作為四個(gè)影響因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，每個(gè)試驗(yàn)選取3個(gè)水平，按L9(34)正交表，進(jìn)行試驗(yàn)并進(jìn)行極差分析，從而得出最佳處。
　　 對(duì)自制的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽(yáng)離子脂質(zhì)體進(jìn)行了初

5、步的質(zhì)量評(píng)價(jià)和穩(wěn)定性考察。質(zhì)量評(píng)價(jià)部分包括對(duì)脂質(zhì)體的pH值、外觀、粒徑分布、形態(tài)以及體外釋放的考察。穩(wěn)定性考察主要包括對(duì)原料藥的影響因素考察，自制的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽(yáng)離子脂質(zhì)體的影響因素以及滲漏率的考察。
　　 在查閱相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，建立了HPLC的熒光檢測(cè)法測(cè)定CPT-11在大鼠和小鼠體內(nèi)的含量。色譜條件為：
　　 流動(dòng)相：乙酸銨(0.075mol/L，加入1％的三乙胺收尾，用36％醋酸調(diào)pH值為4

6、.0)：乙腈=70:30；
　　 激發(fā)波長(zhǎng)：375nm
　　 發(fā)射波長(zhǎng)：530nm
　　 流速：1.0ml/min
　　 進(jìn)樣量：20μl
　　 柱溫：室溫
　　 以自制的CPT-11的溶液為對(duì)照，對(duì)D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽(yáng)離子脂質(zhì)體進(jìn)行了大鼠和小鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究。
　　 結(jié)果：通過(guò)制備工藝的單因素考察和處方因素的正交試驗(yàn)，得出了最佳的制備工藝為加入硫酸銨體積為6ml，

7、加入硫酸銨濃度為0.2mol/L，孵育時(shí)間為45min，孵育溫度為60℃；最佳處方為磷脂200mg、膽固醇66mg、十八胺20mg、D-甘露糖20mg、主藥10mg。
　　 影響因素試驗(yàn)中，CPT-11原料藥在高溫、高濕度試驗(yàn)中，外觀和含量均無(wú)明顯變化。在強(qiáng)光照射試驗(yàn)中，顏色稍有加深，但含量無(wú)明顯變化；D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽(yáng)離子脂質(zhì)體在高溫和強(qiáng)光照射試驗(yàn)中，外觀均發(fā)生了較大的變化，有少量的黃色磷脂塊狀物析出。在體外

8、釋放的考察中，D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽(yáng)離子脂質(zhì)體在pH6.5的磷酸鹽緩沖液(PBS)的釋放介質(zhì)中，48h的累積釋放量小于70％。
　　 以自制的CPT-11溶液為參比制劑，自制的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽(yáng)離子脂質(zhì)體為受試制劑，SD大鼠為試驗(yàn)動(dòng)物，得出的AUC值分別為1.79(μg/ml)·h，36.03(μg/ml)·h。
　　 以自制的CPT-11溶液為參比制劑，自制的肺靶向鹽酸伊立替康脂質(zhì)體為受

9、試制劑，小鼠為試驗(yàn)動(dòng)物，進(jìn)行組織分布的研究，得出的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為：
　　 結(jié)論：制備的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽(yáng)離子脂質(zhì)體粒徑分布較為集中，體外釋放具有較好的緩釋性。光照和溫度對(duì)制劑的穩(wěn)定性有明顯的影響，應(yīng)避光和低溫保存。在大鼠體內(nèi)試驗(yàn)表明，制備的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽(yáng)離子脂質(zhì)體能夠顯著的保護(hù)藥物的活性?xún)?nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)；在小鼠的體內(nèi)試驗(yàn)表明，制備的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽(yáng)離子脂質(zhì)體能夠使藥物更多的