伊立替康長循環(huán)納米脂質(zhì)體的制備、質(zhì)量標準及體外抗腫瘤作用研究.pdf

1、目的:
　　 制備伊立替康長循環(huán)納米脂質(zhì)體，對制備方法進行篩選，并對伊立替康長循環(huán)脂質(zhì)體的處方及制備工藝進行優(yōu)化，確定最佳的制備方案。根據(jù)最佳制備方案制各樣本，并對伊立替康長循環(huán)脂質(zhì)體的各項質(zhì)量標準進行考察研究。以結(jié)直腸癌細胞SW480，肝癌細胞HepG2，乳腺癌細胞MCF-7為細胞模型，考察游離伊立替康、空白長循環(huán)脂質(zhì)體、伊立替康長循環(huán)脂質(zhì)體對上述三種細胞的細胞毒性，并應(yīng)用熒光染色法考察伊立替康長循環(huán)脂質(zhì)體對MCF-7細胞形態(tài)

2、的影響，為該納米劑型應(yīng)用于臨床提供有效的試驗數(shù)據(jù)。
　　 方法:
　　 (1)伊立替康長循環(huán)納米脂質(zhì)體的制備
　　 本實驗考察了不同的制備方法對脂質(zhì)體粒徑和包封率的影響，確定了制備方法為乙醇注入-硫酸銨梯度主動載藥法。然后通過單因素考察和正交試驗設(shè)計確定最佳制備工藝。
　　 (2)伊立替康長循環(huán)納米脂質(zhì)體的質(zhì)量控制與評價研究
　　 按照最佳處方制備伊立替康長循環(huán)納米脂質(zhì)體樣本，分別考察脂質(zhì)體的粒徑

3、、形態(tài)、電位、穩(wěn)定性、體外釋藥等質(zhì)量標準。
　　 (3)伊立替康長循環(huán)脂質(zhì)體的體外抗癌活性研究
　　 選取結(jié)直腸癌細胞SW480，肝癌細胞HepG2，乳腺癌細胞MCF-7為細胞模型，通過MTT法檢測伊立替康長循環(huán)脂質(zhì)體對各種細胞的殺傷能力。采用熒光染色法，考察伊立替康長循環(huán)脂質(zhì)體對人MCF-7細胞形態(tài)及凋亡的影響。
　　 結(jié)果:
　　 (1)伊立替康長循環(huán)納米脂質(zhì)體的制備
　　 選擇乙醇注入-硫酸

4、銨梯度主動載藥法制備的伊立替康長循環(huán)脂質(zhì)體粒徑小且分布均勻，包封率高。確定的最佳處方為:磷脂300 mg，使其濃度為10 mg/mL，膽固醇100 mg，55℃水浴通N2攪拌條件下逐滴加入到0.2 mol/L的溶解了PEG400030 mg，泊洛沙姆60 mg的硫酸銨溶液中，硫酸銨水化介質(zhì)與乙醇體積比為3∶1，55℃水浴通N2條件下保溫攪拌20 min除去有機溶劑，得到空白長循環(huán)脂質(zhì)體。將所得空白脂質(zhì)體在生理鹽水中透析12h，除去外水相

5、中的硫酸銨，形成內(nèi)外硫酸銨梯度，將伊立替康溶液（卵磷脂∶伊立替康=10∶1）加入空白脂質(zhì)體中，55℃下孵育載藥10 min，即得伊立替康長循環(huán)納米脂質(zhì)體。
　　 (2)伊立替康長循環(huán)納米脂質(zhì)體的質(zhì)量控制與評價研究
　　 根據(jù)最佳制備工藝制備的脂質(zhì)體，粒徑在110 nm左右，形態(tài)成圓形、分布均勻、電位在-15 mV左右，包封率達到92％，穩(wěn)定性好，在體外緩慢釋藥，符合Weibull方程(l)n(l)n[100/(100-Q

6、)]=0.3845(l)nt-1.2134,R2=0.9747.
　　 (3)伊立替康長循環(huán)脂質(zhì)體的體外抗癌活性研究
　　 與游離伊立替康溶液相比，伊立替康長循環(huán)脂質(zhì)體對人直腸癌細胞SW480，肝癌細胞HepG2，乳腺癌細胞MCF-7有明顯的抗腫瘤活性，并能夠改變細胞的形態(tài)，促進細胞發(fā)生凋亡。
　　 結(jié)論:
　　 制備的伊立替康長循環(huán)脂質(zhì)體保護了伊立替康的內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)，延長了藥物的作用時間，提高了藥物的抗腫