牛外周血樹突狀細胞亞群鑒定及抗原靶向遞呈研究.pdf

1、樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)是專職的抗原遞呈細胞，研究DCs細胞的表型與功能將為提高獲得性免疫應答效力的方法研究提供理論依據(jù)。本論文旨在鑒定牛外周血中表達趨化因子受體XCR1和C型凝集素受體Clec9A的DCs細胞，分析XCR1+/Clec9A+DCs的表型特征及其在牛傳統(tǒng)DC(cDCs)群體中cDC1和cDC2亞群中的分類地位;研究DCs表面受體的配體和抗體介導的抗原靶向遞呈方法，為抗原靶向性動物分子疫苗設計提

2、供思路。利用磁珠分選、多色流式細胞術分析和qRT-PCR定量等方法鑒定了牛外周血XCR1+/Clec9A+ DCs的類群。結果表明:牛XCR1與Clec9A主要表達于CD26+CADM1+CD205+MHCⅡ+CD11c+CD11b-CD4-CD8-CD163-lin-DC細胞，代表cDCs的一類，而非漿性DC(pDCs)。牛外周血中cDCs可進一步劃分為CD26+CD172a-CD11c+MHCⅡ+lin-DC和CD26-CD172a

3、+CD11c+MHCⅡ+lin-DC，分別代表cDCl和cDC2。同樣的方法證實:牛XCR1的配體XCL1主要表達于自然殺傷細胞(NK)以及活化的CD8+T細胞上。趨化實驗表明:鼠XCL1能夠趨化牛外周血XCR1+ DC的遷移。利用化學合成截短的牛XCL蛋白進行磁珠缺失分選和qRT-PCR分析，結果表明:牛XCL1二硫鍵片段是結合XCR1受體的關鍵區(qū)域。
　　研究中使用O型FMDV多表位重組蛋白(OB7)為模式抗原，設計表達了融合

4、XCL1的靶向抗原分子XCL-OB7及突變體ΔXCL-OB7，在牛體評價了XCL1介導抗原靶向免疫效果。結果表明:XCL-OB7可顯著增強針對O型FMDV的中和抗體應答水平;XCL-OB7免疫組比ΔXCL-OB7免疫組牛產(chǎn)生了較高水平的FMDV特異性抗體，差異顯著(P＜0.05);相反，將Poly(I∶C)和XCL-OB7組合免疫牛則明顯抑制了體液免疫應答水平。使用10000 BID50的O型Mya98 FMDV攻毒，結果顯示，單獨免疫

5、1mg或0.1mg XCL-OB7組，以及1 mgΔXCL-OB7加poly(I∶C)組均獲得了80％(4/5)保護率;單獨免疫1 mgΔXCL-OB7組與1 mg XCL-OB7和poly(I∶C)組分別獲得60％和40％的保護率;滅活疫苗組對照獲得100％保護率;PBS對照組全發(fā)病。Poly(I∶C)與ΔXCL-OB7組合免疫組相對于XCL-OB7單獨免疫組，可明顯阻斷病毒的復制，攻毒后10天測定FMDV非結構蛋白抗體陽性率顯著低于

6、XCL-OB7單獨免疫組（P＜0.01），說明DC活化誘導的細胞免疫對阻斷FMDV的復制至關重要。此外，本研究中利用合成多肽免疫小鼠的方法，成功制備出了三株具有較好親和力的抗牛Clec9A小鼠單克隆抗體，為抗體介導的抗原靶向遞呈研究奠定了基礎。
　　綜合以上研究結果得出:1）牛外周血中表達XCR1和Clec9A受體的DC是CD26+CADM1+CD205+CD11c+CD11b-CD4-CD8-CD163-lin-cDC;2)牛X