G+膿毒癥sTlR2-TLR2平衡狀態(tài)及負性調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:
　　膿毒癥的發(fā)病率和病死率逐年上升，是威脅人類健康的重大疾病，是危重病急救醫(yī)學領域的多發(fā)病和常見病，但在臨床治療上仍未取得突破性進展。膿毒癥是炎癥的不適當過度或不足的免疫反應的結果，TLRs介導了多種致病微生物的信號跨膜傳遞。革蘭氏陽性細菌胞壁成分LTA特異性由TLR2識別，而TLR2介導的炎癥反應中sTLR2被認為是重要的一線調(diào)控因子。但對于TLRs信號途徑，其適當?shù)拿庖叻磻谴傺缀涂寡椎钠胶?，膿毒癥時sTLR2/T

2、LR2所存在的平衡狀態(tài)及其負性調(diào)節(jié)作用有待證實。本項目立足于膿毒癥，以人單核細胞系U937細胞作為研究對象，通過對sTLR2/TLR2分布平衡在TLRs信號途徑負性調(diào)節(jié)中作用機制的研究，明確該信號途徑免疫反應激活和抑制的平衡機制，以此為基礎尋求干預措施，控制在感染時不適當?shù)难装Y反應，阻止膿毒癥的發(fā)生發(fā)展，為治療威脅人類健康的重大疾病提供新的策略。
　　方法:
　　本實驗采用體外培養(yǎng)人單核細胞系U937細胞，分為空白對照組、低

3、劑量LTA組、中劑量LTA組、高劑量LTA，對照組以空白培養(yǎng)液培養(yǎng)，各劑量LTA組培養(yǎng)液中加入不同濃度的LTA，培養(yǎng)至相應時點后收集上清液及細胞，檢測上清液中sTLR2、IL-10及IL-8蛋白水平、核內(nèi)TLR2的mRNA水平、免疫熒光法檢測NF-κB活性。
　　結果:
　　1.免疫熒光染色圖像觀察：
　　經(jīng)LTA刺激后，30ug/mlLTA組較10ug/mlLTA組細胞核內(nèi)NF-κBp65的熒光強度明顯升高，二者均高

4、于正常對照組細胞核內(nèi)p65的量；兩兩比較存在顯著性差異(P<0.01)。
　　2.隨來自金黃色葡萄球菌的脂磷壁酸(LTA)刺激劑量變化，細胞因子sTLR2、IL-10、IL-8分泌，TLR2mRNA表達存在變化。低劑量組、中劑量組sTLR2水平隨時間變化升高，炎癥反應有所控制；高劑量組sTLR2水平隨時間變化下降，IL-8、TLR2mRNA升高明顯，炎癥反應突出。
　　結論:
　　革蘭氏陽性細菌胞壁成分LTA特異性由T

5、LR2識別，啟動NF-kB途徑，誘導機體產(chǎn)生多種炎癥介質(zhì)的瀑布反應。免疫熒光檢測NF-kb轉移實驗中10ug/mlLTA組的細胞核內(nèi)熒光強度值低于30ug/mlLTA組。與40ug/mlLTA組相比，3ug/mlLTA組、10ug/mlLTA組的炎癥反應水平適當，上清液ELISA測定的sTLR2的分泌水平逐漸升高，IL-10的分泌變化不明顯，正是由于可溶性TLR2(sTLR2)的存在，才會使得促炎因子的釋放存在一定的削弱，說明sTLR2

6、在炎癥反應的平衡調(diào)控方面起到了非常重要的作用。檢測細胞核內(nèi)TLR2mRNA的實驗中發(fā)現(xiàn)TLR2mRNA水平大致與上清液中sTLR2水平變化呈相反的趨勢?？紤]這可能是因為sTLR2的產(chǎn)生并不是微生物抗原激活TLR2的結果，而是對TLR2的細胞內(nèi)加工產(chǎn)生的，這一過程不需要額外的蛋白質(zhì)合成。正是由于sTLR2的特殊的合成機制使得sTLR2與TLR2表達出現(xiàn)此消彼長的變化，從而影響到NF-κB信號轉導通路及炎性細胞因子的分泌過程。我們應根據(jù)sT