G+膿毒癥sTlR2-TLR2平衡狀態(tài)及負(fù)性調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:
　　膿毒癥的發(fā)病率和病死率逐年上升，是威脅人類(lèi)健康的重大疾病，是危重病急救醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的多發(fā)病和常見(jiàn)病，但在臨床治療上仍未取得突破性進(jìn)展。膿毒癥是炎癥的不適當(dāng)過(guò)度或不足的免疫反應(yīng)的結(jié)果，TLRs介導(dǎo)了多種致病微生物的信號(hào)跨膜傳遞。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌胞壁成分LTA特異性由TLR2識(shí)別，而TLR2介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中sTLR2被認(rèn)為是重要的一線調(diào)控因子。但對(duì)于TLRs信號(hào)途徑，其適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)效應(yīng)是促炎和抗炎的平衡，膿毒癥時(shí)sTLR2/T

2、LR2所存在的平衡狀態(tài)及其負(fù)性調(diào)節(jié)作用有待證實(shí)。本項(xiàng)目立足于膿毒癥，以人單核細(xì)胞系U937細(xì)胞作為研究對(duì)象，通過(guò)對(duì)sTLR2/TLR2分布平衡在TLRs信號(hào)途徑負(fù)性調(diào)節(jié)中作用機(jī)制的研究，明確該信號(hào)途徑免疫反應(yīng)激活和抑制的平衡機(jī)制，以此為基礎(chǔ)尋求干預(yù)措施，控制在感染時(shí)不適當(dāng)?shù)难装Y反應(yīng)，阻止膿毒癥的發(fā)生發(fā)展，為治療威脅人類(lèi)健康的重大疾病提供新的策略。
　　方法:
　　本實(shí)驗(yàn)采用體外培養(yǎng)人單核細(xì)胞系U937細(xì)胞，分為空白對(duì)照組、低

3、劑量LTA組、中劑量LTA組、高劑量LTA，對(duì)照組以空白培養(yǎng)液培養(yǎng)，各劑量LTA組培養(yǎng)液中加入不同濃度的LTA，培養(yǎng)至相應(yīng)時(shí)點(diǎn)后收集上清液及細(xì)胞，檢測(cè)上清液中sTLR2、IL-10及IL-8蛋白水平、核內(nèi)TLR2的mRNA水平、免疫熒光法檢測(cè)NF-κB活性。
　　結(jié)果:
　　1.免疫熒光染色圖像觀察：
　　經(jīng)LTA刺激后，30ug/mlLTA組較10ug/mlLTA組細(xì)胞核內(nèi)NF-κBp65的熒光強(qiáng)度明顯升高，二者均高

4、于正常對(duì)照組細(xì)胞核內(nèi)p65的量；兩兩比較存在顯著性差異(P<0.01)。
　　2.隨來(lái)自金黃色葡萄球菌的脂磷壁酸(LTA)刺激劑量變化，細(xì)胞因子sTLR2、IL-10、IL-8分泌，TLR2mRNA表達(dá)存在變化。低劑量組、中劑量組sTLR2水平隨時(shí)間變化升高，炎癥反應(yīng)有所控制；高劑量組sTLR2水平隨時(shí)間變化下降，IL-8、TLR2mRNA升高明顯，炎癥反應(yīng)突出。
　　結(jié)論:
　　革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌胞壁成分LTA特異性由T

5、LR2識(shí)別，啟動(dòng)NF-kB途徑，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生多種炎癥介質(zhì)的瀑布反應(yīng)。免疫熒光檢測(cè)NF-kb轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中10ug/mlLTA組的細(xì)胞核內(nèi)熒光強(qiáng)度值低于30ug/mlLTA組。與40ug/mlLTA組相比，3ug/mlLTA組、10ug/mlLTA組的炎癥反應(yīng)水平適當(dāng)，上清液ELISA測(cè)定的sTLR2的分泌水平逐漸升高，IL-10的分泌變化不明顯，正是由于可溶性TLR2(sTLR2)的存在，才會(huì)使得促炎因子的釋放存在一定的削弱，說(shuō)明sTLR2

6、在炎癥反應(yīng)的平衡調(diào)控方面起到了非常重要的作用。檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)TLR2mRNA的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)TLR2mRNA水平大致與上清液中sTLR2水平變化呈相反的趨勢(shì)?？紤]這可能是因?yàn)閟TLR2的產(chǎn)生并不是微生物抗原激活TLR2的結(jié)果，而是對(duì)TLR2的細(xì)胞內(nèi)加工產(chǎn)生的，這一過(guò)程不需要額外的蛋白質(zhì)合成。正是由于sTLR2的特殊的合成機(jī)制使得sTLR2與TLR2表達(dá)出現(xiàn)此消彼長(zhǎng)的變化，從而影響到NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及炎性細(xì)胞因子的分泌過(guò)程。我們應(yīng)根據(jù)sT