卵圓細胞的誘導與分離、增生機制及其在實驗性肝癌發(fā)生中的作用.pdf

1、第一部分大鼠肝卵圓細胞的誘導、分離及鑒定 目的：建立大鼠肝卵圓細胞(hepaticovalcell，HOC)的增殖模型，并探索其分離及鑒定方法。 方法：雄性SD大鼠每天灌喂2-乙酰氨基芴(2-Acetylaminofluroene，2-AAF)，劑量為20mg/kg/d，連續(xù)給藥4天，第5天行2/3肝切除術，術后繼續(xù)給藥一周，術后11-14天取肝組織標本，行常規(guī)組織學及免疫組織化學檢查，體外二步膠原酶灌注結合Percol

2、l密度梯度離心法分離大鼠肝卵原細胞，通過流式細胞術(flowcytometry，F(xiàn)CM)對所分離的細胞進行鑒定。 結果：以2-乙酰氨基芴加三分之二肝切除術成功建立了大鼠肝卵圓細胞增殖模型，HE染色匯管區(qū)可見大量增殖的小圓細胞，并可向肝實質(zhì)內(nèi)延伸，免疫組化證實增生細胞OV-6、c-kit、CK19及AFP染色陽性，而白細胞共同抗原(LCA)染色陰性。以OV-6為第一抗體對所分離的細胞進行流式細胞術檢測，所分得的細胞內(nèi)10％左右為O

3、V6標記陽性的細胞。 結論：2-乙酰氨基芴加三分之二肝切除術可誘導大鼠肝卵圓細胞大量增殖，以二步膠原酶灌注結合Percoll密度梯度離心法分離的細胞群內(nèi)10％左右為OV6標記陽性的細胞。 第二部分細胞因子TNF-α、IL-6在大鼠肝卵圓細胞增殖過程中的作用 目的：探討細胞因子TNF-α、IL-6在大鼠肝卵圓細胞增殖過程中的作用。方法：采用2-乙酰氨基芴(2-Acetylaminofluroene，2-AAF)加2

4、/3肝切除建立大鼠肝卵圓細胞介導的肝再生模型，以行2/3肝切除誘導的肝細胞介導的肝再生模型作為對照，采用RT-PCR檢測TNF-α、IL-6在模型組及對照組肝組織中的表達情況。 結果：TNF-αmRNA表達水平在模型組及對照組術后均明顯上調(diào)，模型組持續(xù)至術后第3天(P＜0.05)，而對照組持續(xù)至術后第6天(P＜0.05)。IL-6mRNA表達水平在對照組術后8h顯著升高(P＜0.05)，而模型組術后表達水平無明顯變化。

5、結論：細胞因子TNF-α的高表達可能與大鼠肝卵圓細胞的增殖過程密切相關。 第三部分卵圓細胞在實驗性肝癌發(fā)生中的作用 目的：探討卵圓細胞在3'-甲基-4-二甲基氨偶氮苯(3'-Me-DAB)誘發(fā)大鼠肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。 方法：用化學致癌劑3'-Me-DAB誘發(fā)SD大鼠肝癌，通過免疫組織化學、RT-PCR、Westernblot技術對大鼠誘癌過程中肝組織內(nèi)卵圓細胞及P53基因表達的變化進行動態(tài)的檢測。