卵圓細(xì)胞的誘導(dǎo)與分離、增生機(jī)制及其在實(shí)驗(yàn)性肝癌發(fā)生中的作用.pdf

1、第一部分大鼠肝卵圓細(xì)胞的誘導(dǎo)、分離及鑒定 目的：建立大鼠肝卵圓細(xì)胞(hepaticovalcell，HOC)的增殖模型，并探索其分離及鑒定方法。 方法：雄性SD大鼠每天灌喂2-乙酰氨基芴(2-Acetylaminofluroene，2-AAF)，劑量為20mg/kg/d，連續(xù)給藥4天，第5天行2/3肝切除術(shù)，術(shù)后繼續(xù)給藥一周，術(shù)后11-14天取肝組織標(biāo)本，行常規(guī)組織學(xué)及免疫組織化學(xué)檢查，體外二步膠原酶灌注結(jié)合Percol

2、l密度梯度離心法分離大鼠肝卵原細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry，F(xiàn)CM)對所分離的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。 結(jié)果：以2-乙酰氨基芴加三分之二肝切除術(shù)成功建立了大鼠肝卵圓細(xì)胞增殖模型，HE染色匯管區(qū)可見大量增殖的小圓細(xì)胞，并可向肝實(shí)質(zhì)內(nèi)延伸，免疫組化證實(shí)增生細(xì)胞OV-6、c-kit、CK19及AFP染色陽性，而白細(xì)胞共同抗原(LCA)染色陰性。以O(shè)V-6為第一抗體對所分離的細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測，所分得的細(xì)胞內(nèi)10％左右為O

3、V6標(biāo)記陽性的細(xì)胞。 結(jié)論：2-乙酰氨基芴加三分之二肝切除術(shù)可誘導(dǎo)大鼠肝卵圓細(xì)胞大量增殖，以二步膠原酶灌注結(jié)合Percoll密度梯度離心法分離的細(xì)胞群內(nèi)10％左右為OV6標(biāo)記陽性的細(xì)胞。 第二部分細(xì)胞因子TNF-α、IL-6在大鼠肝卵圓細(xì)胞增殖過程中的作用 目的：探討細(xì)胞因子TNF-α、IL-6在大鼠肝卵圓細(xì)胞增殖過程中的作用。方法：采用2-乙酰氨基芴(2-Acetylaminofluroene，2-AAF)加2

4、/3肝切除建立大鼠肝卵圓細(xì)胞介導(dǎo)的肝再生模型，以行2/3肝切除誘導(dǎo)的肝細(xì)胞介導(dǎo)的肝再生模型作為對照，采用RT-PCR檢測TNF-α、IL-6在模型組及對照組肝組織中的表達(dá)情況。 結(jié)果：TNF-αmRNA表達(dá)水平在模型組及對照組術(shù)后均明顯上調(diào)，模型組持續(xù)至術(shù)后第3天(P＜0.05)，而對照組持續(xù)至術(shù)后第6天(P＜0.05)。IL-6mRNA表達(dá)水平在對照組術(shù)后8h顯著升高(P＜0.05)，而模型組術(shù)后表達(dá)水平無明顯變化。

5、結(jié)論：細(xì)胞因子TNF-α的高表達(dá)可能與大鼠肝卵圓細(xì)胞的增殖過程密切相關(guān)。 第三部分卵圓細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性肝癌發(fā)生中的作用 目的：探討卵圓細(xì)胞在3'-甲基-4-二甲基氨偶氮苯(3'-Me-DAB)誘發(fā)大鼠肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。 方法：用化學(xué)致癌劑3'-Me-DAB誘發(fā)SD大鼠肝癌，通過免疫組織化學(xué)、RT-PCR、Westernblot技術(shù)對大鼠誘癌過程中肝組織內(nèi)卵圓細(xì)胞及P53基因表達(dá)的變化進(jìn)行動態(tài)的檢測。