西多福韋對人乳頭瘤病毒感染的宮頸癌細胞生長抑制作用的研究.pdf

1、目的：研究我國宮頸癌(cervical carcinoma，CC)及癌前病變中人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染的現(xiàn)狀及其型別特征；探討西多福韋(Cidofovir，CDV)對HPV感染的宮頸癌Hela細胞和Siha細胞增殖生長的抑制作用，以評價西多福韋抗HPV感染和抗腫瘤的應用價值。 方法： 1．臨床研究：①回顧性分析690例患者的HPV檢測、宮頸細胞學及陰道鏡下宮頸組織病理學檢查結果

2、。其中，細胞學檢查應用TCT法(Thinprepcytology test)，高危型HPV檢測應用第二代雜交捕獲實驗(Hybrid CaptureⅡ，HCⅡ)。②回顧性分析153例宮頸癌及癌前病變的石蠟包埋組織標本，提取組織中DNA，應用基因芯片技術檢測HPV亞型。 2．體外研究：①應用MTT比色法和集落形成試驗，測定西多福韋作用前后Hela細胞和Siha細胞的活性；⑦應用實時定量PCR法，觀察西多福韋對Hela細胞中HPV18

3、 E6、E7 mRNA和Siha細胞中HPV16 E6、E7 mRNA表達的影響：③應用Western-blot法，觀察西多福韋用藥前后Hela細胞和Siha細胞中p53、Rb等抑癌基因的表達；④應用流式細胞儀，檢測西多福韋對Hela細胞和Siha細胞的細胞周期和細胞凋亡的影響；⑤應用TRAP-ELISA法，檢測西多福韋用藥前后Hela細胞和Siha細胞端粒酶的活性。 3．體內(nèi)研究：應用Hela細胞和Siha細胞分別建立裸鼠人宮

4、頸癌模型(2×106個細胞/只)。腫瘤形成后，隨機將裸鼠各分為3組，分別在瘤內(nèi)注射PBS、2.5mg/ml西多福韋(0.25mg/次)和5.0mg/ml西多福韋(0.5mg/次)，3次/周，共3周。①通過比較腫瘤體積和重量，觀察西多福韋對裸鼠腫瘤生長的抑制作用；②應用Western-blot法，觀察西多福韋用藥前后腫瘤中p53蛋白的表達；③應用免疫組織化學法檢測各組腫瘤切片中PCNA抗原的表達，同時應用TUNEL技術檢測西多福韋對細胞凋

5、亡的影響。 結果： 1．臨床研究：①宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasia．CIN)Ⅱ/Ⅲ和浸潤癌患者的高危型HPV陽性率均在90.00％以上，且細胞學、病理學級別越高，高危型HPV感染率越高；②HPV負荷量越高，宮頸病變程度越嚴重；③宮頸病變程度不同，其感染的HPV亞型亦有所不同，其中HPV16是主要的致病亞型；④HPV混合感染率隨著宮頸病變病理學級別的增高而增加。

6、 2．體外研究：①MTT比色法和集落形成試驗結果顯示，西多福韋能明顯抑制Hela細胞和Siha細胞的增殖活性，與對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)；②實時定量PCR結果證實，西多福韋能明顯降低Hela細胞中HPV18 E6、E7和Siha細胞中HPV16 E6、E7 mRNA的表達；③西多福韋可使Hela細胞和Siha細胞中p53蛋白的表達增高，且具有劑量依賴關系，還可使細胞中非磷酸化Rb蛋白產(chǎn)物增加，磷酸化Rb蛋白產(chǎn)物降低；④

7、西多福韋能使Hela細胞和Siha細胞阻滯于細胞周期的S期和G1期；⑤與對照組比較，西多福韋能明顯抑制Hela細胞和Siha細胞的端粒酶活性(P＜0.01)。 3．體內(nèi)研究：①西多福韋能明顯抑制接種了Hela細胞和Siha細胞的裸鼠腫瘤的體積和重量，與對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)；②Western-blot結果顯示，西多福韋能增加裸鼠腫瘤中p53蛋白的表達；③西多福韋還可使腫瘤中PCNA的表達降低，誘導腫瘤細胞凋亡。